[发明专利]从一种印度蚯蚓体腔液中得到的引起精子不能游动的蛋白

权利要求书

1.一种新的从蚯蚓Pheretima posthuma中分离到的精子不能游动蛋白，该蛋白具有如下性质：

a.阴离子蛋白，

b.分子量20kDa，

c.无毒且无溶血活性，而且

d.在2分钟之内引起精子不能游动。

2.权利要求1的蛋白，其中当以10-15mg/Kg的剂量施用于大鼠和小鼠一个月时，没有任何不良效果。

3.权利要求1的蛋白，该蛋白能够内用或外用于包括人的哺乳动物。

4.一个新的精子不能游动因子，该因子也可以用作抗致育因子，它包含从属于节肢动物门的蚯蚓Pheretima posthuma中分离到的体腔液抽提物。

5.权利要求4的新的精子不能游动因子，还保护传统的药学上可接受的添加剂。

6.权利要求5的新的精子不能游动因子，它具有凝胶，粉末，胶囊，溶液，药片和乳膏的形式。

7.权利要求4的新的精子不能游动因子，它无毒，当注射入哺乳动物后不表现出溶血活性。

8.权利要求4或5的新的精子不能游动因子，在两分钟之内，它显示出100％精子不能游动的作用。

9.权利要求4的新的精子不能游动因子，它是非固醇类的并且可以外用。

10.一种用一般方法从蚯蚓Pheretima posthuma的成熟标本的从体腔液分离活性因子的方法，其中所述方法包括如下步骤：

a.提供从蚯蚓Pheretima posthuma的成熟标本得到的体腔液(CF)，将CF超声处理后离心，

b.得到上清作为CF的粗抽提物，

c.将CF的粗抽提物进行凝集过滤层析，

d.在280nm处测定蛋白，

e.得到三个蛋白峰并分析每个峰的活性

f.收集活性峰III，冻干，透析，用DEAE柱进行HPLC以进一步纯化，

g.洗脱不受束缚和受束缚的蛋白，

h.研究每个蛋白峰在280nm的吸收，

i.汇集，冻干，透析每个峰，检测它们对精子游动性的活性，并且

j.鉴定出具有引起精子不能游动的第一个受束缚的峰，进行DS-PAGE电泳以检测其纯度及分子量。

11.权利要求10的方法，其中以10-15mg/Kg的剂量，通过将所述体腔液注射入大鼠和小鼠进行毒性检测，注射一个月后没有表现出致死效应。

12.权利要求10的方法，其中用大鼠的红细胞进行溶血实验，将10μl粗提取物加入制备的250μl红细胞中，培育30分钟后红细胞仍然保持完整，表明该蛋白没有任何溶血活性。

13.一种从雄性大鼠和小鼠制备精子悬浮液，用于生物分析的方法，所述方法包括下列步骤：

a.收集有生育能力的雄性大鼠和小鼠的精子，用BWW培养基稀释，用油覆盖、37℃、在CO₂恒温箱、空气中有5％的CO₂，平衡培养基，

b.再次培育精子悬浮液，使精子悬浮起来，

c.收集有高运动活力的精子悬浮液，其具有至少70％向前游动力。

d.精子悬浮液离心5-10分钟，稀释球状精子，得到40-50μl具有所需浓度(2.0×10⁵-2.5×10⁵个精子)的溶液。

14.一种能够内用或外用于哺乳动物的抗生育混合物，该混合物从属于节肢动物门的蚯蚓Pheretima posthuma中得到。