[发明专利]基因工程人单克隆抗地高辛单链抗体及其用途

说明书

本发明涉及一种由基因工程制备的人单克隆抗体，更准确地说，是一种涉及从半合成噬菌体抗体库中克隆的、由人抗体重链可变区及轻链可变区通过一接头连接而组成的、用于检测病人血清地高辛浓度及解救病人地高辛中毒的人单克隆抗地高辛单链抗体。

地高辛是一种被广泛用于治疗充血性心力衰竭及某些心律失常的强心甙。由于地高辛的治疗指数狭窄，用药过量与用药不足时的症状相似，加之其个体差异大，故中毒的发生率高，是临床上最难掌握药物之一；在误服地高辛或由于企图自杀而大量吞服地高辛时可发生致命性的地高辛中毒，目前解除其毒性的最有效的方法是应用由地高辛免疫羊而制备的多克隆抗地高辛抗体的Fab片段。此外，采用抗地高辛抗体的免疫分析法监测血清/血浆地高辛浓度已成为当今治疗性药物监测的典范。监测血清地高辛浓度可为临床提供资料以便调整用药剂量及确定病人对药物的顺从性，另外可确定地高辛中毒时解毒剂的用量。测定血清地高辛浓度，尚可提供其不同个体间生物利用度及药效学差异方面的信息，目前被广泛用于判断地高辛中毒及指导临床用药，对于保证其治疗的有效性及安全性具有重要意义。

根据文献1“地高辛特异性抗体”(Bulter VP，Chen JP.Digoxin-specificantibodies.Proc Natl Acad Sci 1967；57：71-78)中记载，于1967年通过免疫动物成功地制备抗地高辛抗体以来，已相继制成了地高辛特异的血清多克隆抗体、杂交瘤单克隆抗体，在检测血清地高辛浓度及解救由于应用地高辛治疗时所引起的中毒特别是在误服地高辛或由于企图自杀而大量吞服地高辛所引起的致命性的地高辛中毒中发挥了重要作用，关于这一点，在文献2“放射免疫分析法测定血清地高辛浓度及中毒浓度”(Smith TW，Bulter VP，Haber E，etal.Determination of theraputic and toxic serum digoxin concentrations by byradioimmunoassay.N Engl J Med 1969；281：1212-1216)文献3“免疫方法处理中毒”(Rollins DE and Brizgys M.Immunological approach to poisoning.Ann EmergMed 1986；15：1046-1051)中有记载。但这些抗地高辛抗体有下列缺点：(1)由于均源自动物，作为异种蛋白用于人体时可引起免疫反应，既可导致过敏反应，又影响治疗效果，在重复用其治疗地高辛中毒时所产生的不良反应更为严重；(2)由于其分子较大，与地高辛结合后所形成的复合物不易经肾脏排除，既不利于地高辛从体内排除，又由于地高辛在体内滞留的时间长而易与血浆蛋白结合，有可能诱导人体产生抗地高辛抗体进而对地高辛产生封闭作用，使病人对地高辛的敏感性下降，需要加大地高辛的用量方可达到治疗效果，这样又极易发生地高辛中毒；(3)制备复杂、周期长，虽已有商品化的多克隆抗地高辛抗体Fab片段产品，但价格昂贵，使得国内外医院中作为地高辛中毒解毒药的抗地高辛抗体普遍储备不足甚至缺乏；(4)虽然已有应用鼠源性单克隆抗地高辛抗体测定血清地高辛浓度的报道，但尚未见用于治疗地高辛中毒，参见上述文献2“免疫方法处理中毒”及文献4“目前临床上常用的解毒剂”(BowdenCA and Krenzelok EP.Clinical appliccations of commonly used contemporaryantidotes.Drug Saf 1997；16：9-47)。由于人源性单克隆抗地高辛抗体无免疫原性，用于人体时不存在上述抗地高辛抗体所引起的不良反应，可重复用于治疗地高辛中毒，加之其小分子抗体如单链抗体具有清除速度快、组织穿透力强及半衰期短等优点，故是治疗地高辛中毒的理想制剂，但由于用抗原免疫人体存在着伦理学问题，也就说不能随意用抗原免疫人体，故其制备困难，参见文献5“人单克隆抗地高辛抗体的分离及其特点”(Ball WJ，Kasturi R，Tabet M，etal.Isolation and characterization of human monoclonal antibodies to digoxin.JImmunol 1999；163：2291-2298)因此，若能不经免疫制备廉价的人抗地高辛单克隆抗体特别是其小分子抗体如仅由抗体重链可变区及轻链可变区通过一接头组成的单链抗体，则有可能克服目前抗地高辛抗体的不足。