[发明专利]代谢控制的工程化

权利要求书

1.一种包含一核酸序列的细菌宿主细胞，该核酸序列包含一个启动子和一编码异源多肽的核酸序列；所述核酸序列可操纵地与由应答调节蛋白控制的启动子相连；该宿主细胞经遗传修饰从而启动子在不存在氮饥饿的情况下由乙酰磷酸调节。

2.权利要求1的宿主细胞，其中细菌细胞是大肠杆菌细胞。

3.权利要求1的宿主细胞，其中启动子由选自ntrC，phoB，phoP，ompR，cheY，creB，和torR的应答调节蛋白控制。

4.权利要求3的宿主细胞，其中启动子与ntrC结合。

5.权利要求4的宿主细胞，其中启动子是glnAp2。

6.权利要求1的宿主细胞，其中宿主细胞是通过缺失或突变编码组氨酸蛋白激酶的基因而遗传修饰。

7.权利要求6的宿主细胞，其中组氨酸蛋白激酶由glnL编码。

8.权利要求1的宿主细胞，其中异源多肽是代谢物产生所需的生物合成酶。

9.一种宿主细胞，其包含第一种表达盒，该表达盒包含一启动子和一编码异源代谢物生物合成所需的第一种酶的核酸序列；此核酸序列可操纵地与在无氮饥饿情况下由乙酰磷酸调节的启动子相连；该表达盒还包含表达代谢物生物合成所需的其它酶的核酸序列。

10.权利要求9的宿主细胞，其中代谢物是类异戊二烯。

11.权利要求10的宿主细胞，其中类异戊二烯是类胡萝卜素。

12.权利要求10的宿主细胞，其中类异戊二烯是番茄红素，β-胡萝卜素，虾青素，或它们的前体之一。

13.权利要求10的宿主细胞，其中第一种酶是异戊烯二磷酸异构酶，二磷酸香叶基香叶酯合酶，或1-脱氧木酮糖-5-磷酸合酶。

14.权利要求9的宿主细胞，其中第一种酶是烯醇丙酮酸磷酸合酶。

15.权利要求9的宿主细胞，其中宿主细胞是细菌细胞。

16.权利要求15的宿主细胞，其中细菌细胞是大肠杆菌细胞。

17.权利要求15的宿主细胞，其中细胞缺乏功能性组氨酸蛋白激酶基因。

18.权利要求15的宿主细胞，其中启动子由ntrC，phoB，ompR，cheY，creB，phoP或torR控制。

19.权利要求18的宿主细胞，其中启动子与ntrC结合。

20.权利要求19的宿主细胞，其中启动子是glnAp2。

21.权利要求10的宿主细胞，其中宿主细胞还含有第二种表达盒，该表达盒包含可操纵地与受乙酰磷酸浓度调节的启动子相连的编码烯醇丙酮酸磷酸合酶的核酸序列。

22.一种在宿主细胞中生产异源类异戊二烯的方法，包括过表达异源烯醇丙酮酸磷酸合酶；并表达异源类异戊二烯合成所需的生物合成酶。

23.一种在宿主细胞中产生番茄红素的方法，包括表达异源1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶，异源二磷酸香叶基香叶酯合酶，异源八氢番茄红素合酶，异源八氢番茄红素脱氢酶。

24.一种试剂盒，其包含一核酸序列，该核酸序列含有由应答调节蛋白控制的启动子，由此该启动子在规定的宿主细胞中由乙酰磷酸调节；该规定的宿主细胞通过缺失或突变组氨酸蛋白激酶基因而遗传修饰。

25.一种核酸序列，其包含启动子和编码产生第一种代谢物所需的生物合成酶的序列，该序列可操纵地与由第二种代谢物调节的启动子相连，该第二种代谢物的浓度是生物合成第一种代谢物的前体的可用性的指标。

26.权利要求25的核酸序列，其中第二种代谢物是从用于生物合成第一种代谢物的前体产生的废物。

27.权利要求25的核酸序列，其中第一种代谢物是类异戊二烯。

28.权利要求27的核酸序列，其中类异戊二烯是类胡萝卜素。

29.权利要求28的核酸序列，其中类异戊二烯是番茄红素，β-胡萝卜素，虾青素，或它们的前体之一。