[发明专利]基于豌豆质体蓝素PETE启动子的嵌合启动子

说明书

〔说明〕

本发明涉及嵌合表达启动子，特别是适合并适用于植物生物工程领域的。

一般说来，表达启动子是生物工程和遗传操作领域中众所周知的。更具体就植物生物工程而论，编码希望在宿主细胞中产生的多肽的基因的表达程度常常取决于所用的启动子。遍在使用的各种启动子常常只是因为它们的组织特异性或表达强度而限于具体应用或特定细胞组织。例如，可能列举花椰菜花叶病毒的35S启动子，据说它与来源于nos基因的启动子相比是相对较强的启动子，这两种启动子都更特定地用于植物生物工程领域。因此，现在仍需要使得能够克服迄今常用的启动子所固有的那些问题的新颖而有用的启动子。

在以WO97/20056号公布的PCT申请中已报道了解决该问题的一种尝试，它描述了通过在已知的启动子中使用“增强子”(即对启动子的活性具有正向作用)来增加基因表达的程度。“增强”核苷酸序列富有A和T碱基，所述碱基的总量占该“增强子”核苷酸序列的50％以上。特别是，该PCT申请的申请人详细说明了来源于豌豆质体蓝素启动子的“增强子”区的用途。

此处以及权利要求书中所用的表达方式将具有以下含义：

-“核酸”是指DNA或RNA；

-“核酸序列”是指从5’末端朝向3’末端阅读的核苷酸碱基的单链或双链低聚体或多聚体，它包括自我复制型质粒、基因、感染或非感染性DNA或RNA的聚合体以及功能或非功能性DNA或RNA。在本申请所用的核苷酸符号标示中，除非另有说明，否则单链核苷酸序列的左手末端是5’末端；

-“衍生核酸序列”是指从某序列例如通过一个或多个核苷酸的置换、缺失、添加、突变、断裂和/或合成而直接或间接得到的序列；

-“启动子”或“启动子核酸序列”是指翻译起始密码子的核酸上游区，它参与识别和结合RNA聚合酶以及与转录有关的其他蛋白质；

-“植物启动子”是指能够引发植物细胞转录的启动子；

-“组成型启动子”是指能够在所述生物体的整个发育过程中在该宿主生物体的所有或几乎所有组织中表达与所述启动子操作性连接的核酸序列的启动子；

-“组织特异性启动子”是指能够以选择性方式在宿主生物体的某些特定组织中表达与所述启动子操作性连接的核酸序列的启动子；

-“操作性或功能性连接”是指将启动子或启动子核酸序列与要表达的编码希望产生的蛋白质的核酸序列或基因连接，连接的方式要使得该启动子真正影响或驱动该连接核酸序列的转录。应当理解，该启动子序列还可包括位于转录起始位点和翻译起始密码子之间的转录序列；

-“要表达的编码希望产生的多肽的核酸序列或基因”是指编码多肽、优选外源或异源多肽的基因或核酸序列，所述外源多肽更优选药学、治疗学或化妆品学上的活性物质，诸如蛋白质、酶、抑制剂、受体、抗体、抗原、其治疗活性片段。可以通过相应基因或核酸序列在宿主细胞中的表达生产的例举性的异源或外源治疗活性物质是结构蛋白，诸如胶原，铁转移蛋白或运铁蛋白，诸如乳铁蛋白，血液衍生蛋白，诸如血红蛋白，人血清白蛋白，红细胞生成素，生长刺激因子，蛋白水解酶或抗蛋白水解酶，诸如α-抗胰蛋白酶，激素，次生代谢物，消化酶，诸如胃脂肪酶，胰脂肪酶，胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，醇脱氢酶，脑衍生的神经营养因子，心刺激剂或调节剂，以及血压控制剂诸如血管紧张素；

-“表达框”是指能够驱动编码希望在与这类表达框序列相容的宿主生物体中产生的多肽的核酸序列或基因的表达的核苷酸序列。这类表达框一般至少包括一个启动子和转录终止信号，以及可选的用于表达或表达所需的其他因子；

-“载体”是指表达系统，例如用DNA包被的发射物、基于核酸的转运载体、适于传递核酸序列的核酸分子、和自我复制型自主环状DNA，例如质粒、粘粒、噬菌粒等等。当重组微生物或重组细胞培养物描述为“表达载体”的宿主时，这还可包括环状染色体外DNA(诸如象线粒体或叶绿体DNA)，已整合到宿主染色体中的DNA，或者作为整合到宿主基因组中的自主结构在有丝分裂期间通过细胞稳定复制、或者保持在宿主的核或胞质中的载体；

-“质粒”是指能够在细胞中复制的自主环状DNA分子，包括“表达质粒”和“非表达质粒”。当重组微生物或细胞培养物描述为“表达质粒”的宿主时，这还包括环状染色体外DNA分子和已整合到宿主染色体中的DNA分子。若质粒保持在宿主细胞中，则该质粒或者作为自主结构在有丝分裂期间由细胞稳定复制，或者整合到宿主基因组中；