[发明专利]膜囊泡的制法

权利要求书

1.一种由生物样品制备膜囊泡的方法，其特征在于，至少包括一个对样品的阴离子交换层析处理。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，至少包括一个强阴离子交换层析处理步骤。

3.如权利要求1及2中任何一项所述的方法，其特征在于，至少包括一个阴离子交换与凝胶渗透层析步骤。

4.如上述权利要求中任何一项的方法，其特征在于，所述生物样品是生物流体、培养上清液、溶胞液或经预纯化的溶液。

5.一种由生物样品制备膜囊泡的方法，其特征在于，至少包括：

b)样品处理，以制备富含膜囊泡的样品，与

c)样品的阴离子交换层析和/或凝胶渗透层析处理。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，其包括：

a)将膜囊泡(例如胞外体)生成细胞群落于可使囊泡释放的条件下培养，

b)膜囊泡富集步骤，与

c)样品的阴离子交换层析和/或凝胶渗透层析处理。

7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述富集步骤包括澄清阶段，任选继之以浓缩阶段。

8.如权利要求5～7中任何一项所述的方法，其特征在于，所述富集步骤包括亲和层析步骤，优选在染料上进行。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述富集步骤包括低速离心步骤和/或过滤。

10.如权利要求7～9中任何一项所述的方法，其特征在于，所述富集步骤至少包括一个超滤步骤，特别是切向超滤。

11.一种制备膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下列步骤：

a)将膜囊泡(例如胞外体)生成细胞群落于可使囊泡释放的条件下培养，

b)以至少一次超滤或亲和层析步骤处理培养上清液，以产生富含膜囊泡(例如胞外体)的生物样品，与

c)该生物样品的阴离子交换层析和/或凝胶渗透层析处理步骤。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，进一步包括对经处理的制备物的过滤步骤d)。

13.如上述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡的直径介于约60～90纳米。

14.如上述权利要求中任何一项所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由抗原呈递细胞所产生的囊泡，特别是由树状细胞、B淋巴细胞、巨噬细胞或肥大细胞所产生的囊泡。

15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由树状细胞所产生，特别是由人树状细胞所产生。

16.如权利要求1-13中任何一项所述的方法，其特征在于，所述膜囊泡是由肿瘤细胞所产生，特别是人肿瘤细胞所产生。

17.一种制备膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下步骤：

a)获得一树状细胞群落，

b)在可促使膜囊泡产生的条件下培养所述的树状细胞，与

c)利用一种至少包括阴离子交换层析处理在内的方法纯化所述的膜囊泡。

18.一种制备膜囊泡的方法，其特征在于，其包括下列步骤：

a)获得一树状细胞群落，

b)于可促使膜囊泡产生的条件下培养所述的树状细胞，

c)处理该培养上清液以产生富含膜囊泡的生物样品，特别是利用超滤或亲和层析步骤进行，与

d)利用一种至少包括阴离子交换和/或凝胶渗透层析步骤在内的方法纯化所述膜囊泡。

19.如权利要求17或18所述的方法，其特征在于，所述树状细胞取自从测试对象获得的生物样品例如骨髓或外周血液。

20.如权利要求17至19项所述的方法，其特征在于，所述树状细胞未成熟。

21.如权利要求17至20中任何一项所述的方法，其特征在于，所述树状细胞在产生膜囊泡之前先经抗原致敏。

22.如权利要求17至21项中任何一项所述的方法，其特征在于，在步骤b)中是将所述树状细胞于刺激膜囊泡产生的条件下培养。

23.阴离子交换层析用于制备或纯化膜囊泡的应用。