[发明专利]圣塔景天

说明书

圣塔景天是景天科，圣塔属，种名为绿叶大花圣塔(简称圣塔景天)，(Cotyledonmacrantha De Smet var，vivescens(Sohoent.et.Bak.f.)V.Poelln缩写为CMSVP)，高60～80cm，茎直径4～5cm，形似小树，叶片肥厚，叶宽14cm，长18cm，鲜叶均重52.5g，树冠直径为34cm。

常绿多年生肉质半灌木，高约1米，茎肥厚呈园柱略弯曲状，具向光性，茎部稍木质化，多二歧对称分枝成一整齐美观挺拔树形，枝节从根部周围分枝，主干无分权，根呈须发状，随树长高，茎部大叶慢慢变黄呈黑干状，向下卷曲枯萎脱落，脱落后的主茎上留有口唇状疤痕，叶对生，无柄，贴茎，尖端初生嫩叶肥厚呈凹状，下部叶大而肥厚呈凸状，倒卵匙形，叶长18～20cm，宽14～16cm，尖端园阔，靠茎部渐渐变窄呈匙状，最大叶重约60g，整株叶为12片。

原产南非，世界各地均栽培，为观赏植物，以其树姿挺拔、壮丽著称。生长较快，扦插与组织培养繁殖极易成活，我国多喜栽为盆景。

本发明的圣塔景天的提取液或原粉对抗肿瘤和增强免疫效应，降血糖等作用分别叙述如下：1、CMSVP提取液或原粉制造实施例：1.1、实施例1

取洗净的圣塔景天叶子1kg，粉碎后，用石油醚(30-60)回流脱脂2h，残渣置于1升无离子水，煮沸0.5h，过滤，残渣继续重复上述操作3次，合并4次滤液，浓缩至小体积，加氯仿(A、R)至分层，沉淀弃蛋白，上层溶液浓缩至小体积，浓缩，烘烤，得圣塔景天(CMSVP)原粉，产量22.86g，收率2.29％。(见附图1-1)。1.2、实施例2

取鲜CMSVP叶子或茎500g溶于2升无离子水，加热煮沸5分钟，过滤，滤液浓缩至小体积，将上述操作重复3次，合并4次滤液，浓缩至含10g/ml鲜圣塔景天(CMSVP)原粉供抗肿瘤与增强免疫实验使用。2、圣塔景天(CMSVP)的抗肿瘤作用和对免疫功能增强效应：2.1、实验材料与方法2.1.1药品与主要试剂

CMSVP提取液和原粉均由北京泰达士生物化学研究所提供。刀豆蛋白A购自美国Sigma公司，³H-TdR购自中国原子能科学研究院，强度1mCi(3.7×10⁶kbp)。细菌脂多糖由北京生物制品研究所提供。其它试剂均为国产分析纯。2.1.2实验动物和瘤株

昆明小鼠，8周龄，体重19-21g，雌雄各半；C57BL/6小鼠，8周龄，体重19-21g，雌雄各半；均由北京大学动物学部提供。小鼠黑色素瘤B16、小鼠Lewis肺癌接种于C57BL/6小鼠；小鼠肉瘤S180和艾氏腹水癌接种于昆明小鼠，以上细胞株均由中国预防医学科学院提供。2.2、实验方法2.2.1体内抑瘤实验

剥离小鼠腋下传代的黑色素瘤B16和Lewis肺癌的瘤快，取生长良好的肿瘤组织研磨成肿瘤匀浆，以0.2ml/只接种于C57BL/6小鼠腋下。无菌取腹腔内传代7d肉瘤S180和艾氏腹水癌细胞，生理盐水洗涤3次，以1×10⁶细胞接种于昆明小鼠腋下。接种后次日起灌胃给予CMSVP提取液，每日1次连续10d(剂量见表2-1)。以氮烯咪胺(DTIC)作为小鼠黑色素瘤B16的阳性对照组，其余均用环磷酰胺(CTX)作为阳性对照药，于第1、3、5、9天腹腔注射给药。第11天脱颈处死小鼠，称瘤重，计算肿瘤生长抑制率(Inhibition Rate，IR)。2.2.2脾细胞对丝裂原ConA反应的影响

制备脾细胞悬液，调节细胞浓度5×10⁶个/ml)。向96孔板中加入脾细胞悬液0.2μl/孔，ConA 100μl/孔(终浓度为5μl/ml)，同时设自身对照(不含ConA)。培养72h，终止培养前6h加入³H-TdR 20μl/孔(含0.4μCi)。收集细胞于滤膜上，烤干，在液闪仪上测定³H-TdR掺入量。结果刺激指数(Stimulation Index，SI)表示。2.2.3 NK细胞活性测定

取生长良好的L929细胞(作为靶细胞)加到96孔培养板，培养2h，使细胞贴壁成单层细胞。再加入上述脾细胞悬液0.1ml/孔，对照组只加入靶细胞，继续培养20h后用生理盐水洗涤3次，每孔加入0.2ml 0.5％中性红染液，培养30min，弃染液洗涤3次，每孔加细胞溶解液20μl，轻轻摇均，用酶标仪在492nm波长处测定吸光度。结果以NK细胞杀伤率表示。2.2.4脾细胞分泌的TNF活性测定