[发明专利]一种新的多肽——gammal－吡咯啉－5－羟基还原酶12和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--gamma 1-吡咯啉-5-羟基还原酶12，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

在生物的氨基酸代谢及合成过程中，谷氨酸代谢中的碳和氮被用于脯氨酸及精氨酸的生物合成。脯氨酸在生物体内起着十分重要的生理学功能，脯氨酸残基经翻译后修饰生成4-羟基-L-脯氨酸，该氨基酸为某些蛋白尤其是胶原蛋白的重要组分。而众所周知，胶原蛋白在生物体内涉及维持骨腱、血管、软骨和皮肤强度等众多的生物学过程，是生物体中的重要组成成分之一。

δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶(P5CR)在生物体内催化从谷氨酸到脯氨酸的生物合成过程的最后一步，即NAD(P)依赖的1-吡咯啉-5-羟基氧化为脯氨酸。该酶的表达异常将直接影响生物体内脯氨酸的合成，进而影响一些相关的重要蛋白质的合成，即影响一些重要的生理过程。

1990年，Delauney A.J.等人从大肠杆菌中克隆得到了一δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶，该酶的序列与其它来源的δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶亦有较高的同源性，研究发现，该酶在生物体内可能通过渗透调节来调节其表达[Delauney A.J.,Verma D.P.,Mol Gen Genet,221:299-305]。

δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶在生物界的分布非常广泛，从真细菌、古细菌到真核生物均存在该酶。该酶在这些生物体内均有着较高的序列相似性，δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶的C末端均含有如下所示的保守的一致性序列片段：[PALF]-X(2,3)-[LIV]-X(3)-[LIVM]-[STAC]-[STV]-X-[GAN]-G-X-T-X(2)-[AG]-[LIV]-X(2)-[LMF]-[DENQK]；所有不同来源的δ1-吡咯啉-5-羟基还原酶均含有这一保守的序列片段，该序列片段可能是酶活性中心，该位点的突变将导致酶的失活，从而影响脯氨酸的最终合成及影响一系列相关的生物学过程。该蛋白在生物体内与一些脯氨酸代谢紊乱相关的疾病、胶原蛋白相关疾病的发生密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12。

由于如上所述gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与gamma1-吡咯啉-5-羟基还原酶12异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。