[发明专利]一种人蛋白磷酸聚糖蛋白及其编码序列

说明书

本发明涉及分子生物学、免疫学、生理学以及基因工程等领域。具体地，本发明涉及一种在人类垂体中表达的hPPG-1蛋白及其核酸序列。本发明还涉及该蛋白和核酸序列的制备方法和用途。

蛋白磷酸聚糖(Proteophosphoglycan，PPG)是一种Leishmania major前鞭毛体中新发现的类似于粘蛋白(mucin)的糖蛋白。PPG的糖链类似于一种以巨噬细胞为宿主的寄生受体脂磷酸聚糖(lipophosphoglycan)，人们便试着让它结合巨噬细胞。结果发现，PPG结合了巨噬细胞，抑制了肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)alpha亚基的合成，同时合成干扰素gamma(interferon-gamma)刺激巨噬细胞产生氮氧化物。这些结果表明，PPG可能在Leishmania.sp.结合到宿主细胞的过程中起作用，同时又在感染初期对被感染的巨噬细胞的生物学特性的调节上扮演了重要角色。(Microbes Infect 1999 Jul；1(8)：589-599)。

本发明中，我们在人类垂体中克隆到Leishmania majorPPG基因的同源基因hPPG-1。

在本发明被公布之前，尚未有任何公开或报道过本专利申请中提及的人类hPPG-1蛋白序列及其核酸序列。

本发明的第一目的就是提供一种新的人基因hPPG-1(Genbank AccessionNo.AF241786)，该基因是一个人hPPG-1蛋白基因。

本发明的第二目的是提供一种新的人蛋白hPPG-1。

本发明的第三目的是提供一种利用重组技术生产上述的新的人hPPG-1蛋白和核酸序列的方法。

本发明还提供了这种人hPPG-1蛋白多肽和编码序列的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，该分子包括：编码具有人hPPG-1蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第510-1118位DNA分子的核苷酸序列有至少70％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.6中从核苷酸第510-1118位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码具有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的多肽。更佳地，所述的序列具有SEQ ID NO.6中从核苷酸第510-1118位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离出的人hPPG-1蛋白质多肽，它包括：具有SEQ ID NO.7氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO.7序列的多肽。

在本发明的另一方面，还提供了一种载体，它包含上述的DNA分子。

在本发明的另一方面，还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞。在一个实例中该宿主细胞是大肠杆菌；在另一实例中，该宿主细胞是真核细胞。

在本发明的另一方面，还提供了一种产生具有人hPPG-1蛋白质活性的多肽的方法，其步骤如下：

(1)将编码具有人hPPG-1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成人hPPG-1蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.6中从核苷酸第510-1118位的核苷酸序列有至少70％的同源性；

(2)将步骤(1)中的表达载体转入宿主细胞，形成人hPPG-1蛋白的重组细胞；

(3)在适合表达人hPPG-1蛋白多肽的条件下，培养步骤(2)中的重组细胞；

(4)分离出具有人hPPG-1蛋白活性的多肽。

较佳地，在该方法中使用的核酸序列具有SEQ ID NO.6中第510-1118位的序列。

本发明还提供了与hPPG-1蛋白多肽特异性结合的抗体。

在本发明中，“分离的”、“纯化的”或“基本纯的”DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组份分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。