[发明专利]胶体金免疫层析狂犬病病毒抗体检测试剂条及制备方法

说明书

本发明涉及一种检测狂犬病病毒抗体的试剂条，本发明还涉及该试剂条的制备方法。

狂犬病的预防和治疗，均采用注射狂犬疫苗的方法，但疫苗注射后人体内是否产生了有效抗体，目前还没有适合的检测方法，注射了疫苗仍有死亡病例发生。

本发明的目的是要提供一种能够简易、快捷地检测狂犬病病毒特异抗体的试剂条。

本发明的另一目的是要提供该试剂条的制备方法。

本发明的解决方案是在硝酸纤维素膜上包被检测线和对照线，检测线侧贴有金标抗体吸水纤维，对照线侧贴有吸水滤纸，其中检测线是包被狂犬病毒抗原，对照线是包被金标抗体，狂犬病毒抗原合适包被量为5—15μg蛋白，金标结合物合适抗体量为2—8μg/ml。检测时，抽取被测者少量血液，滴在该试剂条上，对比检测线和对照线的颜色，确定人体内是否产生了有效抗体。

本发明试剂条的制备方法是：

采用狂犬病毒标准株CVS株，感染传代地鼠肾细胞(BHK)，制备特异性狂犬病毒抗原，制备免疫层析纸条。用胶体金标记抗人IgG的多克隆抗体，制成金标结合物纤维条。

本发明的试剂条具有以下优点：

检测狂犬病毒抗体的方法简单、易操作、快速、特异性好，不需要借助其它仪器设备，适合各级医院及个人使用。

以下结合附图及实施例对本实用新型进一步说明：

附图为本发明的试剂条示意图。

本发明的试剂条是在硝酸纤维素膜1上包被检测线2和对照线3，检测线2侧贴有金标抗体吸水纤维4，对照线3侧贴有吸水滤纸5，其中检测线2包被的是狂犬病毒抗原，对照线3包被的是金标抗体，狂犬病毒抗原合适包被量为10μg蛋白，金标结合物合适抗体量为4μg/ml。将试剂条装入塑料检测板中可制成试剂盒。

其制备方法是采用狂犬病毒标准株CVS株，感染地鼠脑组织悬液，感染BHK单层细胞(1代)，病变后收上清液，感染BHK单层细胞(2代)，在35℃条件下经过24—48小时，洗三次换无血清液，在35℃条件下经过4—5天，收毒液，通过离心机处理，条件为5000rpm/min离心15min，收上清液，加入1/10000β丙内酯灭活，经超滤浓缩，采用琼脂糖凝胶过滤，制得狂犬病毒抗原，在硝酸纤维素膜上包被狂犬病毒抗原线和金标抗体线制成试剂条。

用本发明的试剂条检测狂犬病毒抗体的敏感性适宜与酶联法测抗体比较，偏低一个滴度，特异性好，稳定性好。用参比血清标准标定，血清含中和抗体达0.5IU/ml值时，检测线2出现紫红色的阳性反应，如检测线2无此反应，即为阴性，表明血清中没有狂犬病抗体或抗体量不足，对照线3不管血清中有没有狂犬病抗体均出现紫红色的阳性反应，表明试剂条有效，如对照线3无反应，说明试剂条失效。根据WHO规定标准，中和抗体达到0.5IU时，人体才能有免疫力，否则应及时加强免疫。