[发明专利]动物细胞或器官的保存剂及其保存方法

说明书

本发明涉及动物细胞或器官的保存剂。详细的说，涉及动物细胞、移植用器官及血液、血细胞、血小板等的保存剂，蛋白质的稳定剂，或在器官移植后预防、治疗、改善器官障碍等的保存剂。

通常，为了保存细胞是在-196℃的极低温度下冷冻保存，必要时将这些冷冻细胞迅速解冻得到活细胞。但是，虽然这种冷冻·熔解后的生存率依赖于细胞的种类和实验者的熟练程度，可是除癌以外的正常有用细胞，例如胰岛及肝细胞的生存率极低，至多为10～30％。

另外，由于血细胞成分及血小板不能冷冻保存，所以其有效期为12～72小时，非常短。加上虽然器官移植的病例增加，而移植器官的保存方法却仍为一项重要研究课题而被遗留，这与细胞增殖和细胞障碍有很大关系。

随着近年来外科手术和免疫抑制剂的发展，器官移植的病例日益增加。对于这种器官移植，理想的是由供者(donor)摘除的器官直接移植给受者(recipient)，但是未必能够直接进行移植手术。因而伴随移植手术的紧急性，贵重器官的保存问题就显得非常重要了。目前，作为器官保存的方法使用的是以抑制器官代谢为目的的低温保存法和以维持代谢为目的的灌流保存法，为此开发了各种保存液在临床上应用。

在早期移植使用Euro-Collin’s液，但是器官的保存时间即使是肝脏也不超过24小时，这就需要能更长时间保存的保存液。但是，最近美国Wisconsin大学的课题组开发出作为胰脏移植保存液的UW液(University of Wisconsin，Wahlberg，J.A.，et al.，Transplantation，43，pp.5-8，1987)，这种保存液不仅可以保存胰脏，也可以作为肝脏和肾脏的保存液使用，肝脏可以保存24小时。

但是，仍然不能满足需要，因而非常需要开发一种能长时间保持器官生存能力(viability)、具有更优良的器官保存效果的保存液。

各种器官共同之处在于由于缺血以及血流再灌注时产生的自由基，促进生物膜的脂质过氧化，引起生物膜障碍，结果造成移植器官的功能障碍。所以，如果能够防止由于产生这种过氧化脂质而出现的细胞障碍，就可以开发出更有效的保存液。

近年来，报道了大量关于自由基对生物体影响的研究，对于抗氧化物质也逐渐清楚。作为目前已知的主要抗氧化物质有酶类的超氧化物歧化酶(SOD)，以及非酶类的维生素E、维生素C、谷胱甘肽、类胡萝卜素、黄酮类、糖类、铁的螯合剂、尿酸、白蛋白等。

已知关于利用这些抗氧化物质抑制组织增殖及保存器官的研究还不是很多，但是，最近报道发现绿茶多酚具有抗氧化作用、除臭作用、抗菌作用及抗癌作用。近年来，这种绿茶多酚作为功能性食品原料大量、廉价生产。

另一方面，细胞与组织的障碍与在细胞线粒体中由三磷酸腺苷(ATP)转换成的次黄嘌呤(hypoxanthin)转变成黄嘌呤(xanthine)过程中产生的活性氧(O^-₂)有很大关系。由这种障碍最严重的结果是发生癌变，癌的产生过程被认为是经过癌症引发和癌症增进过程产生的。在癌症引发中，各种致癌物质对细胞DNA引起障碍导致突变，细胞无限增殖造成组织癌变。这种突变也受活性氧的影响。除此以外，产生这种活性氧的过氧化物也是老化及各种疾病的重要原因之一。

在本发明中，通过自由控制各种动物细胞的增殖，在了解细胞增殖机理的同时，开发出保存用于器官移植的各种器官以及保存血液时，将以往的可保存时间延长至少2倍以上的保存液，同时提高了蛋白质的保存稳定性。

具体的说，能够控制正常有用细胞的增殖，不冷冻而长时间保存，通过控制与细胞增殖分裂有很大关系的自由基，自由控制细胞的增殖·分裂。

本发明提供含有作为有效成分的多酚，用于细胞学及组织学领域的动物细胞或移植用器官的保存剂。另外还提供了使用该保存剂，保存动物细胞或器官的方法。

本发明的多酚例如绿茶酚的主要成分儿茶素类及鞣酸等。

特别是多酚优选儿茶素类，其中包括作为3，3，4，5，7-黄戊醇已知的儿茶素、具有3，4-二羟基苯基骨架的儿茶酚胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺，特别优选以表棓儿茶素为主要成分的儿茶素类。

其他优选的多酚例如鞣酸。这里，所谓鞣酸是指通过水解生成没食子酸的多酚化合物。一般的，例如药典中的鞣酸是8个没食子酸基结合在葡萄糖残基的周围，其构象在同一平面，另外有2个没食子酸基在垂直方向结合的物质。

但是，化合物的中心部分未必只限于是葡萄糖，也可以是纤维素类化合物，也可以使用鞣酸水解得到的没食子酸二缩酸酐(didebrisidegallate)等。