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[发明专利]过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途-CN202011263639.0有效
发明人：不公告发明人 -专利权人：柏玉兰
申请日： 2020-11-12 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了过氧麦角甾醇体外培养NK细胞提高其杀伤力的用途。本发明发现，过氧麦角甾醇孵育可以有效提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力，且该杀伤力随着过氧麦角甾醇孵育浓度的提高而增强。因此，可以将过氧麦角甾醇用于NK细胞体外培养，获得杀伤力更强的NK细胞，为过继性NK细胞治疗创造更好的疗效。
过氧麦角体外培养 nk 细胞提高杀伤力用途

[发明专利]一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法-CN202211494461.X在审
发明人：王芝辉;徐娟;曹启龙;梁少帅;董友玉;张文茜 -专利权人：青岛海尔生物科技有限公司
申请日： 2022-11-25 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明提供了一种磁珠偶联因子复合物及扩增NK细胞的方法，属于生物免疫学技术领域，具体为一种磁珠偶联因子复合物，包括磁珠、4‑1BBL，IL21，MICA；磁珠偶联因子复合物在制备NK细胞中的应用及扩增NK细胞的方法；本发明提供的磁珠偶联因子复合物，能够富集在细胞团周围，持续作用，对NK细胞的激活和扩增作用更优，本发明制备的NK细胞扩增倍数、NK阳性率，作用效果更优。
一种磁珠偶联因子复合物扩增 nk 细胞方法

[发明专利]一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用-CN201711298786.X有效
发明人：朱武凌;路臣桂;张会勇;李冬贝;郭长江;李明凤;夏文姣;王晓银;吕探宇 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2017-12-08 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用。该抗肿瘤NK细胞为经嵌合共刺激转换受体改造的NK细胞；所述的嵌合共刺激转换受体由PD‑1胞外段、NKG2D跨膜及胞内段，以及共刺激分子41BB胞内段组成。本发明所述的抗肿瘤NK细胞，采用嵌合共刺激转换受体对NK细胞进行改造，能够提高NK细胞的抗肿瘤治疗效果，实现对实体瘤的特异性识别和杀伤，并且不会引起机体过激的免疫应答反应。
一种肿瘤 nk 细胞及其制备方法应用

[发明专利]一种增强型抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用-CN201711297539.8有效
发明人：朱武凌;路臣桂;李明凤;李冬贝;郭长江;张会勇;夏文姣;王晓银;吕探宇 -专利权人：新乡医学院
申请日： 2017-12-08 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种增强型抗肿瘤NK细胞及其制备方法和应用。该抗肿瘤NK细胞为经双重靶向嵌合受体改造的NK细胞；所述的双重靶向嵌合受体由PD‑1胞外段、NKG2D全长段，以及共刺激分子41BB胞内段组成。本发明所述的抗肿瘤NK细胞，采用双重靶向嵌合受体对NK细胞进行改造，能够提高NK细胞的抗肿瘤治疗效果，实现对实体瘤的特异性识别和杀伤，并且不会引起机体过激的免疫应答反应。
一种增强肿瘤 nk 细胞及其制备方法应用

[发明专利]一种灭活饲养细胞联合细胞因子刺激NK细胞扩增的方法-CN201811622843.X有效
发明人：葛淑娟;徐矫健;刘燕丽;王玉娟 -专利权人：青岛麦迪赛斯生物科技有限公司
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明的目的是提供一种新型灭活重组K562细胞联合细胞因子组合刺激NK细胞扩增的方法。本发明制备得到的NK细胞，具有很高的纯度和杀伤活性，经检测培养至14天时，NK细胞纯度达90％以上；当效靶比为10:1时，NK细胞对K562细胞的杀伤活性为80％以上。本发明制备的NK细胞增殖速度快，培养至14‑17天细胞扩增倍数达500以上，本发明制备的NK细胞有很好的靶向杀伤肿瘤细胞的效果。
一种饲养细胞联合细胞因子刺激 nk 扩增方法

[发明专利]截短的NKG2D嵌合受体及其在自然杀伤细胞免疫疗法中的用途-CN201880029848.3在审
发明人：梁峻豪;岛崎纪子;萧思文;D·坎帕纳;J·B·特拉格尔;A·L·L·拉泽迪克;郭超;路旋·郭·布伦;S·S·马斯拉尼 -专利权人：新加坡国立大学;恩卡尔塔公司
申请日： 2018-03-27 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： A61K35/17 文献下载
摘要：本文披露的若干实施例涉及包含表达嵌合受体的工程改造的自然杀伤(NK)细胞的组合物，该嵌合受体赋予这些NK细胞增强的靶向特定细胞例如癌细胞或受传染病影响的细胞的能力。若干实施例涉及靶向表达NKG2D的天然配体的细胞的NK细胞，其中这些NK细胞包含当这些NK细胞结合靶细胞时导致细胞毒性和/或细胞溶解作用的跨膜和/或信号传导结构域。在若干实施例中还提供了NK细胞组合物用于治疗疾病的用途。
细胞嵌合受体细胞溶解作用信号传导结构靶向表达靶向特定工程改造天然配体细胞毒性自然杀伤靶细胞癌细胞传染病赋予

[发明专利]一种体外培养扩增NK细胞的方法-CN201510608389.2在审
发明人：张燕;程双凤;张赞 -专利权人：上海柯莱逊生物技术有限公司
申请日： 2015-09-22 - 公布日： 2015-12-23 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞的体外培养扩增方法，具体为一种用自体外周血单个核细胞在体外培养大量扩增NK细胞的方法，该方法利用A群链球菌制剂作为刺激剂，激活NK细胞，并联合细胞因子IL-2共同刺激培养NK细胞，使获得的NK细胞具有数量大、纯度高、细胞毒性强等特点，从而能够满足临床的需要。本发明操作简单便捷，仅通过A群链球菌制剂和IL-2两种制剂就实现了对NK细胞的激活和扩增，既保证了NK细胞的扩增掊数、流式表型和细胞毒性，又大大降低了NK细胞的培养成本，使用推广简单易行。
一种体外培养扩增 nk 细胞方法

[发明专利]过表达hACE2基因的NK细胞制剂的制备方法-CN202010094664.4在审
发明人：王清路;许晓松;付娟 -专利权人：王清路;许晓松
申请日： 2020-02-16 - 公布日： 2020-05-29 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种过表达hACE2基因的NK细胞制剂的制备方法。NK细胞分离与激活，构建hACE2过表达载体，电转将hACE2过表达载体转进NK细胞，采用带有hACE2抗体的磁珠筛选表达hACE2的细胞，即得过表达hACE2基因的NK细胞制剂。本发明首先确定了能够实现特异性、高效识别新冠状病毒和SARS病毒靶位点的人hACE2基因序列，而后通过质粒电转染的方法导入NK细胞，利用免疫磁珠筛选hACE2阳性细胞群及测序鉴定，获得过表达hACE2基因的NK细胞。本发明过表达hACE2基因的NK细胞制剂的生产，大大提升了NK细胞消除以hACE2为受体的病毒能力。
表达 hace2 基因 nk 细胞制剂制备方法

[发明专利]一种肝靶向配体及其在脂质体制剂中的应用-CN201910788202.X在审
发明人：吴卫;周婷;唐欣;张玮 -专利权人：桂林医学院
申请日： 2019-08-26 - 公布日： 2019-11-15 - 主分类号： C07K16/28 文献下载
摘要：本发明公开了一种肝靶向配体及其在脂质体制剂中的应用，该配体是肝细胞生长因子经胰弹力蛋白酶水解获得的单链抗体片段，包括N末端的发夹结构和4个Kringle结构，即为NK4肝靶向配体；NK4肝靶向为NK4蛋白分子本发明还利用配体NK4与肝细胞生长因子c‑Met受体特异性结合的原理，以HGF单链抗体片段NK4作为肝靶向配体制备NK4表面修饰脂质体制剂，介导药物主动靶向于肝脏组织；既能达到靶向识别结合肝癌细胞的目的，又能通过NK4阻断HGF/c‑Met信号通路活性，抑制肿瘤细胞生长，协同增强药物抗肿瘤效果。NK4介导的脂质体药物递送系统在肝肿瘤靶向治疗方面存在较大的应用潜力。
肝靶向配体肝细胞生长因子单链抗体片段脂质体制剂介导抑制肿瘤细胞生长受体特异性结合弹力蛋白酶肝肿瘤靶向抗肿瘤效果脂质体药物靶向识别表面修饰蛋白分子递送系统发夹结构肝癌细胞肝脏组织信号通路应用潜力主动靶向水解协同治疗应用

[发明专利]高效扩增脐带血NK细胞的无血清培养方法-CN201910845554.4在审
发明人：阳莉;王太林 -专利权人：阳莉
申请日： 2019-09-06 - 公布日： 2019-12-24 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效扩增脐带血NK细胞的无血清培养方法，包括以下步骤：1)制作第一培养基和第二培养基；2)抗体包被；3)MNCs分离及自体血浆制备；4)NK细胞诱导培养；5)NK细胞扩大培养；6)NK细胞收集本发明NK细胞扩增倍数高、纯度高、成本低、操作步骤简便，同样适用于外周血；本发明提供的分离培养方法解决了脐带血淋巴细胞难获得的问题，培养初始阶段排除了红细胞的污染，后期收获的NK细胞纯度均可达到70％以上，弥补了肿瘤病人NK细胞培养纯度低及数量不足的缺点，在同种异体NK细胞回输方面具有巨大的优势；本发明添加物和培养基配方单一，不易混淆和差错，培养流程简单，技术人员可以很容易的实施。
培养基扩增脐带血淋巴细胞红细胞添加物培养基配方无血清培养分离培养抗体包被扩大培养同种异体诱导培养自体血浆脐带血外周血回输制备差错混淆肿瘤收获污染制作

[发明专利]一种NK细胞扩增用培养基及培养方法-CN202111309621.4在审
发明人：曾东升;罗培红;罗培学 -专利权人：曾东升
申请日： 2021-11-06 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种NK细胞扩增用培养基，由以下成分组成，基础培养基、钨酸铋微粉、洋蓟素、橄榄苦甙、甘油磷脂、葡萄糖、IL‑2、IL‑4、IL‑15、谷氨酸、精氨酸。本发明提供的NK细胞扩增用培养基，添加钨酸铋微粉能有效促进NK细胞的活化，提高细胞活力，促进NK细胞的分裂增殖。培养基中还添加洋蓟素、橄榄苦甙减少NK细胞在培养过程中的损伤，起到修复细胞作用，添加甘油磷脂保护细胞膜，提高NK细胞的保水增殖能力。上述成分和培养基中葡萄糖、IL‑2、IL‑4、IL‑15、谷氨酸、精氨酸等成分共同作用有效提高NK细胞的扩增效率，培养得到的NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性较好。
一种 nk 细胞扩增培养基培养方法

[发明专利]一种免疫细胞NK的冻存液及其活性研究方法-CN202110206293.9在审
发明人：李雯雯;陈艳普;凡苗振;袁浩 -专利权人：河南省银丰生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2021-02-24 - 公布日： 2021-07-02 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明公开了一种免疫细胞NK的冻存液及其活性研究方法，包括免疫细胞NK的分离、细胞NK的无血清体外扩增、分析细胞NK的生长曲线、分析细胞NK表面抗原表达、分析细胞NK周期、免疫细胞NK的冻存及复苏、免疫细胞各项指标检测无血清培养基悬浮培养体系，分离获得的免疫细胞NK具有较强的增殖能力，利用细胞冻存液1冻存的细胞复苏后，细胞活性在四种细胞冻存液中的细胞活性最高，在90%以上，流式细胞仪检测结果表明，冻存前的细胞与冻存复苏后的细胞的免疫表型无明显差异
一种免疫细胞 nk 冻存液及其活性研究方法

[发明专利]CD16抗体联合细胞因子体外扩增NK细胞的培养方法-CN202210794041.7在审
发明人：梁仲恒;贾轲;吕玉静;杨弯 -专利权人：广州希灵生物科技有限公司
申请日： 2022-07-07 - 公布日： 2022-09-20 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及体外扩增NK细胞的方法领域，尤其涉及CD16抗体联合细胞因子体外扩增NK细胞的培养方法。其中抗CD16抗体通过结合NK细胞表胞的CD16位点，增强IL‑15和IL‑2对NK细胞的刺激，以及ADCC对肿瘤细胞的杀伤作用，进而诱导NK细胞活化，获得扩增的效率和纯度更高的NK细胞。可高效扩增NK细胞，14天内细胞扩增148倍。NK细胞纯度高，具有很高的临床价值。
cd16 抗体联合细胞因子体外扩增 nk 细胞培养方法

[发明专利]一种NK细胞的扩增方法-CN202310351592.0在审
发明人：徐子恩;弗莱德·范德里希;胡建杰 -专利权人：贝美缇（上海）健康科技有限公司
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N5/0783 文献下载
摘要：本发明涉及一种NK细胞的扩增方法。本发明使用的CD16、曲妥珠单抗可以快速有效的使NK细胞受到信号刺激，并利用抗癌药Krestin作为细胞刺激因子，活化NK细胞，促进细胞因子的合成，有效提高NK细胞的杀伤毒性，在培养液中提供了NK细胞生长所需的多个激活及扩增信号蛋白分子，提高不同来源单个核细胞中NK细胞的扩增效率；培养过程中先在包被的培养瓶中培养，再用细胞培养袋培养，既可以保证NK细胞被充分激活，又避免了高浓度抗体对细胞诱发的凋亡，保证了扩增效率。整个培养过程易控，利用本方法可在体外大规模扩增数量多、细胞活性高、杀伤力强的NK细胞，选用的药剂易得，可有效降低细胞培养成本。
一种 nk 细胞扩增方法

[发明专利]一种CAR-NK细胞保存液及其制备方法、保存方法-CN202211721991.3在审
发明人：彭大为;湛振键;郑世鑫;刘世豪 -专利权人：广东康盾高新技术产业集团股份公司;海口健康岛生物科技有限公司
申请日： 2022-12-30 - 公布日： 2023-03-28 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提出了一种CAR‑NK细胞保存液及其制备方法、保存方法，包括以下成分：无水葡萄糖、氨基酸、维生素B、辅酶Q10、无患子皂苷、桑黄酮和人血清白蛋白；所述氨基酸为L‑谷氨酰胺、L‑亮氨酸、L‑苏氨酸、本发明制备获得的CAR‑NK细胞保存液，60h后CAR‑NK细胞活率均维持在91％以上，在150h后CAR‑NK细胞活率均维持在83％以上，本发明的CAR‑NK细胞保存液，可有效延长CAR‑NK细胞的保存时间，维持CAR‑NK细胞的活力，能够较好地保证CAR‑NK细胞体外保存情况下，对肿瘤细胞仍具有较好的杀伤功能表达。
一种 car nk 细胞保存及其制备方法