本发明公开一种应用RPA技术检测HPV高危16型的引物探针组合物,其中正向引物序列如SEQ ID No.1所示,反向引物序列如SEQ ID No.2所示,探针序列如SEQ ID No.3所示。本发明方法根据HPV高危16型基因组序列设计了大量RPA引物和探针,从中筛选出一对可快速有效检测HPV高危16型核酸的引物及探针组合。应用本发明提供的引物对和探针及相应的试剂盒可以对妇女宫颈上皮细胞、生殖道分泌物等未知样本中的HPV高危16型DNA片段进行快速恒温荧光检测。检测结果可用于HPV高危16型感染的辅助诊断及宫颈癌的早期筛查、宫颈病变的随访、指导疫苗的开发。