本发明涉及一种顺式环氧琥珀酸水解酶的编码基因、其编码的多肽及其相关应用,所述顺式环氧琥珀酸水解酶的编码基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列,由该基因编码的顺式环氧琥珀酸水解酶具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。用所述顺式环氧琥珀酸水解酶基因构建的原核表达载体转化大肠杆菌构建基因工程菌,该基因工程菌经过诱导后能将顺式环氧琥珀酸或其盐高效率地转化为L(+)-酒石酸或其盐,从该大肠杆菌中获得的顺式环氧琥珀酸水解酶具有将顺式环氧琥珀酸或其盐高效率地转化为L(+)-酒石酸或其盐的能力。
本发明公开了一种重组环氧琥珀酸水解酶,源自红球菌RNA,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,其编码基因的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还提供了一种了该重组环氧琥珀酸水解酶的基因蛋白表达、纯化及酶促反应动力学研究方法和结果,通过体外构建基于大肠杆菌的重组菌株,该重组菌株经过诱导后能将环氧琥珀酸(本发明所涉及的环氧琥珀酸均指顺式环氧琥珀酸,以下同)高效转化为L(+)‑酒石酸。此外,本发明还提供一种测定方法,可快速测定该重组菌株中诱导表达的重组环氧琥珀酸水解酶活力。
本发明公开了一种具有顺式环氧琥珀酸水解酶活性的编码基因,其序列如SEQ ID NO:1所示,氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。同时涉及将该基因在大肠杆菌工程菌株中进行分泌型表达,使重组菌有氧培养后的发酵液能够直接进行酶转化,催化顺式环氧琥珀酸水解为D‑酒石酸,该基因工程菌命名为CM‑TA‑122,保藏号为CCTCC M 2016456本发明利用挖掘的新顺式环氧琥珀酸水解酶编码基因,建立了适合工业化操作的酶生产及酶催化工艺,该路线高效、低成本。