本发明公开了一种内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯的方法,该内酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于编码上述内酰胺酶的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯的方法包括:在缓冲液体系中,将底物和上述内酰胺酶混合反应,底物为2‑氮杂双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑3‑酮。该内酰胺酶具有底物耐受度高,活性高的特点,将其用于酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯中的方法中,其能够使得较高浓度的底物在该内酰胺酶的作用下充分反应,获得收率和手性纯度较高的(1R,4S)‑文斯内酯,