本发明涉及钾离子通道调控蛋白技术领域,具体涉及一种重组载体、表达载体、基因工程菌及其应用。该重组载体是将SEQ ID NO.1所示DNA序列插入pPrey‑PartnerSUS‑2in1‑Dest载体的NruI和NdeI位点之间获得的,命名为pKY2in1‑Dest,该表达载体是将钾通道基因以及其它调控蛋白基因通过该基因工程菌是将所述的表达载体转入受体菌获得的。本发明的基因工程菌可应用于大规模筛选影响钾离子通道钾吸收功能的调控蛋白,通过观察低钾条件下酵母生长,直接展示对钾通道功能影响,具有条件简单、成本低和实验周期短的特点。