本发明提供了一种柔嫩艾美耳球虫的免疫抗原、抗体及其制备方法和应用,属于重组蛋白制备技术领域。一种柔嫩艾美耳球虫的免疫抗原,所述免疫抗原为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的柔嫩艾美耳球虫水通道蛋白2的胞外区。一种抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体,由所述免疫抗原免疫动物得到。本发明首次成功通过转染细胞的方式免疫小鼠制备抗柔嫩艾美耳球虫水通道蛋白EtAQP2多克隆抗体,填补了目前市场上柔嫩艾美耳球虫EtAQP2抗体的空白,为柔嫩艾美耳球虫基因的功能鉴定和疫苗的研发奠定基础。
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种基于PCR技术检测和鉴别牛体内致病艾美耳球虫的引物对、及其方法与试剂盒,所述引物对包括上游引物和下游引物;所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述下游引物的核苷酸序列如本发明针对邱氏艾美耳球虫和牛艾美耳球虫的ITS1基因序列的保守区域设计引物对,使其相应扩增片段中仅包含多个单核苷多态性位点,扩增效率基本相同,假阴性低,可用于致病艾美耳球虫检测和虫种鉴定。本发明还建立了牛体内致病艾美耳球虫PCR检测方法;根据PCR产物的凝胶电泳图可检测牛体内致病艾美耳球虫,根据PCR产物的测序结果可进行致病艾美耳球虫的虫种鉴定。
本发明公开了一种毒害艾美耳球虫亚单位疫苗及其制备方法和应用。所述毒害艾美耳球虫亚单位疫苗包括毒害艾美耳球虫SAG13蛋白,所述毒害艾美耳球虫SAG13蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。本发明以毒害艾美耳球虫SAG13蛋白作为亚单位疫苗候选蛋白,深入分析其信号肽和跨膜结构域,创造性地去除信号肽和跨膜结构域的多肽序列,发现其能够有效激发鸡抵抗毒害艾美耳球虫感染的免疫保护力,即可作为高效亚单位疫苗