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[发明专利]一种鼠伤寒沙门氏菌回复株的构建方法-CN201910289219.0在审
发明人：刘永生;敬文宪;李学瑞;周建华;马丽娜;陈启伟 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-04-11 - 公布日： 2019-07-05 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明提供一种鼠伤寒沙门氏菌回复株的构建方法，包括以下步骤：(1)构建鼠伤寒沙门氏菌目的基因缺失株/pKD46；(2)构建鼠伤寒沙门氏菌目的基因缺失株::kansacB/pKD46；(3)构建含有目的基因的线性基因打靶DNA片段；(4)将步骤(2)得到的鼠伤寒沙门氏菌缺失株::kansacB/pKD46制备成电转感受态细胞，将步骤(3)制备的含有目的基因的线性基因打靶DNA片段转入其中，37℃培养后，得到鼠伤寒沙门氏菌回复株本发明通过对缺失基因进行原位回复，并以终止密码子的同义替换为回复株标记，从而达到对目标基因进行高效回复的目的，使研究基因的功能更加的精细，准确。
鼠伤寒沙门氏菌回复构建目的基因基因打靶制备感受态细胞终止密码子目标基因缺失基因同义替换研究基因电转精细转入

[发明专利]一种用于枯草芽孢杆菌基因编辑系统的构建方法及其应用-CN202310588520.8在审
发明人：付媛媛;丁明;何丛颖;章礼平;刘奎;刘磊;周月越;王晓朋;宋微微;詹萍萍 -专利权人：宁波海洋研究院;宁波大学
申请日： 2023-09-19 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开了一种枯草芽孢杆菌的基因编辑系统的构建方法及其应用，实现了无痕基因敲除及敲入，属于基因工程领域。该方法首先筛选并拼接含有正负筛选标记的基因敲除/入盒，并构建组成型红色荧光表达盒，从而构建相应基因敲除/入质粒；然后将该质粒转入枯草芽孢杆菌，通过反复传代提高基因敲除/入盒替换靶基因的概率，之后通过无抗生素培养进行质粒消除；最后，通过仅含同源臂的消除质粒介导编辑后正负筛选标记的去除及质粒的可视化消除，实现基因的无痕编辑。本发明首次在枯草芽孢杆菌中构建含正负筛选标记及荧光标记的穿梭质粒，并实现了多个基因的无痕敲除及敲入。
一种用于枯草芽孢杆菌基因编辑系统构建方法及其应用

[发明专利]一种基因构建体以及产生多谱系造血干祖细胞的方法-CN202210044106.6在审
发明人：王金勇;吴冰燕;张梦云;张琪;彭欢 -专利权人：北京干细胞与再生医学研究院
申请日： 2022-01-14 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本申请公开了一种基因构建体，其包含RUNX1基因、HOXA9基因以及HLF基因和/或HOXA7基因。还公开一种宿主细胞，其包含串联连接的RUNX1基因、HOXA9基因以及HLF基因和/或HOXA7基因。还公开一种利用前述基因构建体产生多谱系造血干祖细胞的方法，以及该方法产生的多谱系造血干祖细胞和血液细胞。还公开一种药物组合物及其应用，所述药物组合物包括前述基因构建体、前述载体、前述宿主细胞、前述造血干祖细胞或如前述血液细胞。本申请在单细胞水平上寻找合适的基因构建体，使得在单细胞精度上可以诱导多能干细胞定向分化为造血祖细胞，并在体内实现多谱系造血重建。
一种基因构建以及产生谱系造血细胞方法

[发明专利]一种粘红酵母高产油脂及亚油酸基因工程菌的构建方法和应用-CN201310421519.2有效
发明人：汪阳东;陈益存 -专利权人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所
申请日： 2013-09-16 - 公布日： 2014-01-15 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明涉及一种粘红酵母高产油脂及亚油酸基因工程菌的构建方法和应用，其基因工程菌的构建方法主要将油桐油酸脱氢酶基因vfFAD2基因和二酰甘油酰基转移酶vfDGAT2构建融合表达载体导入粘红酵母，使vfFAD2基因和vfDGAT2基因在粘红酵母体内获得高效表达。与未转基因粘红酵母相比，本发明的转基因粘红酵母转化子油脂含量提高2.76倍，亚油酸含量提高25.86%。
一种酵母高产油脂油酸基因工程构建方法应用

[发明专利]经口递送基因构建物-CN96194471.4无效
发明人： P·E·达多纳;G·G·狄查达里维安;J·A·菲克斯;P·I·加德纳;H·B·罗森 -专利权人：阿尔萨公司
申请日： 1996-06-07 - 公布日： 1998-07-08 - 主分类号： A61K9/00 文献下载
摘要：本发明涉及递送基因构建物至胃肠道内定向区的方法。以丸剂递送基因构建物会引起治疗有效果的治疗蛋白质在靶位点的表达。本发明还涉及在靶位点递送基因构建物的装置。
递送基因构建

[发明专利]雪莲查耳酮合成酶基因(chs)、其编码蛋白及其克隆方法-CN200610011401.2无效
发明人：赵德修;虞珍珍;程丽琴;徐亮胜;金治平 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2006-03-01 - 公布日： 2007-09-05 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明提供了雪莲cDNA文库构建方法，并利用此文库通过简并引物筛选雪莲中编码基因(包括雪莲查耳酮合成酶基因)的方法，和利用特异引物通过PCR克隆雪莲查耳酮合成酶基因的方法。提供了雪莲查耳酮合成酶基因chs的全长cDNA序列及编码的氨基酸多肽序列。该cDNA序列全长1,313bp，编码389个氨基酸的多肽。该cDNA可用于构建正义基因构建体。利用该构建体可控制植物或植物培养体提高黄酮产量。
雪莲查耳酮合成基因 chs 编码蛋白及其克隆方法

[发明专利]筛选功能核苷酸分子的方法-CN200480032070.X无效
发明人：上野高嗣;田边雅茂;住冈理早;小林英二;小山信人;佐川裕章;峰野纯一;加藤郁之进 -专利权人：宝生物工程株式会社
申请日： 2004-08-25 - 公布日： 2006-12-06 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：一种筛选能有效抑制基因表达的核酸的通用方法，在该方法中使用的核酸构建体、载体；以及上述方法的试剂盒。该方法的特征是构建一种核酸构建体，其是具有启动子序列、至少两个基因序列和聚腺苷酸信号序列的核酸构建体，其中上述至少两个基因序列转录成单一RNA分子，并且至少一个基因序列是可翻译状态，且至少一个基因序列为基本上不可翻译的编码状态
筛选功能核苷酸分子方法

[发明专利]一种敲除prcK基因的自杀质粒pYTKLKRT及其构建方法-CN201310572458.X有效
发明人：葛菁萍;王洋;由田;平文祥 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2013-11-15 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：一种敲除prcK基因的自杀质粒pYTKLKRT及其构建方法，它涉及一种自杀质粒及其构建方法。敲除prcK基因的自杀质粒pYTKLKRT由prcK基因左侧片段prcKL、prcK基因右侧片段prcKR、四环素抗性基因和质粒pUC18构成。构建方法：一、扩增片段prcKL；二、得到质粒pUC18-KL；三、扩增片段prcKR；四、得到质粒pUC18-KLKR；五、扩增四环素抗性基因Tet；六、得到敲除prcK基因的自杀质粒pYTKLKRT
一种 prck 基因自杀质粒 pytklkrt 及其构建方法

[发明专利]一种敲除prcR基因的自杀质粒pYTRLRRT及其构建方法-CN201310572456.0有效
发明人：葛菁萍;王洋;由田;平文祥 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2013-11-15 - 公布日： 2014-02-19 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：一种敲除prcR基因的自杀质粒pYTRLRRT及其构建方法，它涉及一种自杀质粒及其构建方法。敲除prcR基因的自杀质粒pYTRLRRT由prcR基因左侧片段prcRL、prcR基因右侧片段prcRR、四环素抗性基因和质粒pUC18构成。构建方法：一、扩增片段prcRL；二、得到质粒pUC18-RL；三、扩增片段prcRR；四、得到质粒pUC18-RLRR；五、扩增四环素抗性基因Tet；六、得到敲除prcR基因的自杀质粒pYTRLRRT
一种 prcr 基因自杀质粒 pytrlrrt 及其构建方法

[发明专利]一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法-CN200810064829.2有效
发明人：平文祥;葛菁萍;凌宏志;杜春梅;宋刚;赵丹;高冬妮;于新 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2008-06-30 - 公布日： 2008-11-12 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：一种表达木糖还原酶基因的质粒的构建方法，它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了酿酒酵母中缺少木糖还原酶，不具备木糖代谢能力，不能有效发酵植物纤维水解液的问题。构建方法：先克隆XYL1基因、ADHt基因序列和KanR基因；再回收、纯化步骤一至三制备的基因片段，分别与载体连接；然后构建质粒pADH、质粒pAK；再将XYL1基因引入质粒pAK，即得到表达木糖还原酶基因的质粒本发明方法将木糖还原酶基因XYL1和乙醇脱氢酶的强启动子的终止子序列构建于同一个质粒载体上，在增添了木糖代谢为乙醇的途径外，还抑制了木糖代谢为木糖醇，能够介导酿酒酵母高效代谢木糖生产乙醇。
一种表达还原酶基因质粒构建方法

[发明专利]JMML相关基因甲基化水平评估方法、模型及构建方法-CN202111567840.2有效
发明人：伍建;姬晓雯;王海丽;刘娜;韩路 -专利权人：北京迈基诺基因科技股份有限公司
申请日： 2021-12-21 - 公布日： 2022-04-19 - 主分类号： G16B5/00 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种JMML相关基因甲基化水平评估方法、模型及构建方法，通过确定JMML相关基因甲基化位点、设计探针，提取样本DNA，构建JMML相关基因甲基化文库，根据构建的JMML相关基因甲基化文库，进行碱基识别，去除序列接头以及删除低质量碱基后比对至人基因组hg19，去冗余提取所有CpG位点，对JMML相关基因甲基化位点CpG进行聚类，按照聚类顺序划分高甲基化、中甲基化、低甲基化，构建数据库；本发明方法以及构建的模型可减少全基因组甲基化测序的成本高和耗时长的问题，便于更高效快速的对JMML相关基因甲基化水平进行评估，利于JMML预后风险评估。
jmml 相关基因甲基化水平评估方法模型构建

[发明专利]小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法-CN200810155962.9无效
发明人：杨中州;吕镗烽;沈小昆;宋勇 -专利权人：南京大学
申请日： 2008-10-14 - 公布日： 2010-06-09 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：一种小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒的构建方法，它是将包含小鼠Akt1基因启动子片段插入pBluescriptIISKM(pBS)载体的XbaI位点间，构建包含小鼠Akt1基因启动子片段的pBS/XbaI4.5质粒；然后，将包含小鼠Akt1基因第一编码外显子ATG片段插入pBluescriptIISKM载体的NotI位点间，构建包含小鼠Akt1基因第一编码外显子片段的pBS/LA1.9质粒；最后，将小鼠Akt1基因启动子插入pGL3-basic载体的SamI和NcoI位点间，构建小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒pGL3/mAkt1-pro。本发明利用分子克隆技术构建小鼠Akt1基因启动子荧光素酶质粒，从而便于对抗肿瘤药物的筛选研究。
小鼠 akt1 基因启动子荧光质粒构建方法

[发明专利]一种精神分裂症基因-基因互作网络的构建方法-CN201911021952.0有效
发明人：杨新平;高玥;梁小珍;任重鲁;李彦君;迟雅丽 -专利权人：南方医科大学南方医院
申请日： 2019-10-24 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： G16B20/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种精神分裂症基因‑基因互作网络的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：①收集已知精神分裂症候选基因；②将上述收集的已知精神分裂症候选基因映射在人类蛋白质‑蛋白质互作网络，转换成以基因命名的相互作用网络；③对网络中的所有基因进行R‑score赋值，对网络中的所有基因进行G‑score赋值，对每条边赋予权重；④构造节点间最短路径矩阵；以“游走扩展”法提取初步网络；⑤提取最终网络，输出结果。本发明构建精神分裂症基因‑基因互作网络移除了部分假阳性基因，囊括进来了更多的与精神分裂症相关的潜在候选基因，富集分析结果表明，保留的基因与精神分裂症更相关，表明本发明构建的基因互作网络质量更优。
一种精神分裂症基因网络构建方法

[发明专利]基于系统进化树的泛基因组构建方法和构建装置-CN202010260748.0在审
发明人：张锦波;鲍冠辉;李季 -专利权人：北京诺禾致源科技股份有限公司;北京诺禾致源生物科技有限公司;天津诺禾致源生物信息科技有限公司;天津诺禾医学检验所有限公司;南京诺禾致源生物科技有限公司
申请日： 2020-04-03 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： G16B40/30 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于系统进化树的泛基因组构建方法和构建装置。该构建方法包括：对不同株系的菌株进行系统进化树构建，得到系统进化树；根据不同株系的菌株在系统进化树上的不同位置，按照从底层到顶层的方向两两聚类，逐层进行泛基因组构建，得到不同株系总的泛基因组。该方法从底层到顶层的泛基因组构建，不仅解决了现有方法中比对结果不准确的问题，而且使得每一个进化节点的泛基因组都可以得到，从而可以从更加细致的进化角度来分析存在/缺失变异结果。
基于系统进化基因组构建方法装置

[发明专利]小鼠表观遗传基因敲除筛选文库及其构建方法-CN202110050866.3有效
发明人：张业;孙文政;陈菲;代辉 -专利权人：中国医学科学院基础医学研究所
申请日： 2021-01-14 - 公布日： 2022-07-15 - 主分类号： C40B40/06 文献下载
摘要：本发明涉及小鼠表观遗传基因敲除筛选文库及其构建方法，小鼠表观遗传基因敲除筛选文库包括靶向表观遗传相关基因的SgRNA表达质粒，靶向表观遗传相关基因包括赖氨酸乙酰转移酶基因、组蛋白去乙酰酶基因、组蛋白赖氨酸甲基转移酶基因、组蛋白赖氨酸去甲基化酶基因、蛋白质精氨酸甲基转移酶基因、组蛋白识别、DNA甲基化相关基因、RNA甲基化相关基因、染色质重塑复合物基因、染色质组装及组蛋白伴侣基因。本发明构建的基因文库，为双质粒表达系统，质粒相对较小，构建比较容易操作；同时筛选文库仅仅针对表观遗传基因，文库相对较小，进行单细胞测序相对容易进行数据分析。
小鼠表观遗传基因筛选文库及其构建方法