本发明公开了一种鉴定鲢鱼幼苗性别的分子生物学方法,属于分子生物学领域,本发明的目的是提供鲢鱼幼苗DNA性别的特异性片段和其雄性特异引物及鉴定鲢鱼幼苗性别的方法。本发明的技术方案是,其特异性片段的序列为Hmmf1和Hmmf2。鉴定鲢鱼幼苗性别的分子生物学方法,利用设计的特异引物及对照管家基因GAPDH的引物以鲢鱼个体基因组DNA为模板进行PCR扩增,反应体系为25μl,在PCR仪上按30个循环参数进行PCR扩增,在凝胶成像系统下观察并拍照记录,100bp DNA ladder作分子量标记,出现大小为800bp目的条带的是雄性个体,没有条带的即为雌性个体。