本发明提供了用于呼吸道病毒检测的RPA引物、探针组以及试剂盒,属于病毒检测技术领域,所述呼吸道病毒包括呼吸道合胞病毒A型、冠状病毒NL63和腺病毒‑7;检测所述呼吸道合胞病毒A型的上游引物序列、下游引物序列和荧光探针的序列如SEQ ID No.1~3所示;检测所述冠状病毒NL63的上游引物序列、下游引物序列和荧光探针的序列如SEQ ID No.4~6所示;检测所述腺病毒‑7的上游引物序列、下游引物序列和荧光探针的序列如SEQID No.7~9所示。本发明所述引物、探针组具有特异性好、灵敏度高的优点,能够用于现场快速检测呼吸道合胞病毒A型、冠状病毒NL63、腺病毒7型。
本发明提供了一种快速检测3型人腺病毒的含内参双重等温核酸扩增方法,属于等温核酸扩增技术领域。本发明首先通过对3型人腺病毒(HAdV‑3)基因测序和比对,设计了用于检测HAdV‑3的特异性引物对和探针,并设计了内参探针,其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示,在此基础上建立了含内参的双重等温核酸扩增体系,进一步构建了用于检测3型腺病毒的试剂盒。本发明方法在等温条件下进行,5‑20min内可实现同时对3型腺病毒和内参DNA的扩增,灵敏度高、特异性好、内参的加入排除了假阴性和无效结果,更适合应用于有大量样品的检测,便于临床上的应用,该方法适用于对3型腺病毒的快速检测。
本发明属于生物工程技术领域,具体公开了基于目的基因S1的人5型复制缺陷型重组腺病毒,所述人5型复制缺陷型重组腺病毒的目的基因S1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,且所述目的基因S1可在人源细胞或人体内表达该人5型复制缺陷型重组腺病毒在细胞模型中体现出良好的免疫原性,能够有效诱导机体发生体液及细胞免疫反应,并安全性良好。另外,本发明中的人5型复制缺陷型重组腺病毒制备方法操作步骤简单易行,具有极高的应用价值,可以在短时间内大量生产并应用于可能突发的疫情。并且目的基因S1经优化后,在转染细胞中的表达水平显著提高。