本发明提供一种青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因及应用。AaWRKY4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示;AaWRKY4蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。过量表达AaWRKY4基因提高青蒿中青蒿素含量的方法如下:从青蒿中克隆青蒿WRKY类转录因子AaWRKY4基因;构建含AaWRKY4基因的植物表达载体;用根癌农杆菌介导,将AaWRKY4基因转入青蒿并再生出植株;PCR检测目的基因整合情况;HPLC‑ELSD测定转基因青蒿中青蒿素的含量,筛选获得青蒿素含量提高的转基因青蒿植株。本发明提供的转AaWRKY4基因青蒿的青蒿素含量比非转化青蒿提高了35%‑50%,为青蒿素的规模化生产提供了高产、稳定的植物基源。
本发明公开了一种青蒿bZIP类转录因子,该转录因子标记为AaABF3,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其氨基酸序列如SEQ IDN O:2所示。本发明的编码bZIP类转录因子AaABF3通过与青蒿素合成关键酶基因ALDH1的启动子片段结合,并且激活ALDH1的表达,从而促进青蒿素合成;利用转基因技术将青蒿AaABF3基因过量表达载体转化青蒿显著提高转基因青蒿的青蒿素的含量;利用转基因技术将青蒿AaABF3基因干扰载体转化青蒿显著降低转基因青蒿的青蒿素的含量。该发明中AaABF3基因可应用于青蒿品质改良,可提高青蒿中青蒿素的含量,对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
本发明公开了一种青蒿MYB类转录因子编码序列AaMIXTA1,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,该编码序列编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的编码序列编码MYB类转录因子AaMIXTA1,正调控青蒿分泌型腺毛的密度;利用转基因技术将青蒿AaMIXTA1转录因子过量表达载体稳定转化青蒿可以有效提高青蒿表皮的分泌型腺毛密度,从而提高转基因青蒿的青蒿素的含量;利用转基因技术将青蒿AaMIXTA1转录因子干扰载体稳定转化青蒿可以有效降低青蒿表皮的分泌型腺毛密度,从而降低转基因青蒿的青蒿素的含量。该发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
本发明涉及一种青蒿AaORA蛋白及编码基因、转基因青蒿植株的获得方法;所述青蒿AaORA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示;同时,本发明还涉及编码青蒿AaORA蛋白的核酸序列、植物干扰表达载体、根癌农杆菌菌株以及一种转基因青蒿植株的获得方法。本发明从青蒿中克隆AaORA基因,构建含AaORA基因的植物干扰表达载体,用根癌农杆菌EH105介导,将AaORA基因干扰表达载体转化青蒿;PCR检测外源目的基因AaORA的整合情况,高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定青蒿中青蒿素含量,筛选获得青蒿素含量明显降低的转基因青蒿植株。