本发明涉及生物工程技术领域,具体涉及猪粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子重组蛋白及其制备方法和应用。本发明提供的猪粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子重组蛋白为以下1)或2)中的蛋白:1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;2)氨基酸序列为在SEQ ID NO.1所示序列的N端和/或C端添加蛋白标签和/或酶切位点后得到的序列
green fluorescent protein,EGFP)报告基因构建融合蛋白慢病毒表达载体用于牛诱导性多能干细胞的诱导,对表达外源限定因子融合蛋白的牛胎儿成纤维细胞进行培养传代,逐步分离培养出集落边缘界限清晰的细胞克隆,细胞集落生长状态稳定,核型正常,碱性磷酸酶检测为阳性,免疫细胞化学检测显示Oct4、Nanog、SSEA-1蛋白表达为阳性,体内能够分化形成含有三个胚层的畸胎瘤,结果证实分离培养的细胞克隆具有胚胎干细胞样特征