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[发明专利]高产γ-亚麻酸卷枝毛霉重组菌的构建方法、该方法构建的重组菌及应用-CN202210762108.9在审
发明人：宋元达;王秀文;杨武;杨俊换 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2022-06-29 - 公布日： 2022-08-12 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了高产γ‑亚麻酸卷枝毛霉重组菌的构建方法、该方法构建的重组菌及应用，属于基因工程技术领域。本发明高产γ‑亚麻酸卷枝毛霉重组菌的构建方法是将Δ6、Δ12和Δ9脂肪酸去饱和酶基因的核酸序列连接到表达载体中，获得的重组载体转化到卷枝毛霉双缺陷型菌株中，筛选阳性克隆，使Δ6、Δ12和Δ9脂肪酸去饱和酶在卷枝毛霉双缺陷型菌株中过表达，即获得所述高产γ‑亚麻酸卷枝毛霉重组菌。本发明方法构建的重组菌株Mc‑d61d12d91的GLA含量显著提高，可达到总脂肪酸的19.8％，产油量也有所提高，可达到其生物量的38.2％，因此GLA的产量可达到1.22g/L。
高产亚麻酸卷枝毛霉重组构建方法应用

[发明专利]一种利用纤维素高效合成γ-亚麻酸的卷枝毛霉工程菌株的构建方法及应用-CN202010360500.1有效
发明人：张瑶;王艳霞;宋元达;杨武 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2020-04-30 - 公布日： 2022-04-22 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用纤维素高效合成γ‑亚麻酸的卷枝毛霉工程菌株的构建方法及应用，属于基因工程和生物技术领域。本发明的菌株构建方法涉及在产脂丝状真菌卷枝毛霉中同时过表达Δ6脂肪酸脱饱和酶（Delt‑6）和纤维素酶（CBH2）基因。所得到的基因工程菌能利用纤维素高效合成γ‑亚麻酸，为大力推广卷枝毛霉利用纤维素底物工业化生产γ‑亚麻酸提供指导。
一种利用纤维素高效合成亚麻毛霉工程菌株构建方法应用

[发明专利]一种用于提高卷枝毛霉产油量的二羧酸转运体-CN201811402942.7在审
发明人：宋元达;杨俊换;杨武;李少琦 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于提高卷枝毛霉产油量的二羧酸转运体，属于基因工程领域，本发明从高产油卷枝毛霉WJ11克隆获得二羧酸转运体dit基因，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Mu402中，通过同源重组将dit基因整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mc‑Dit，最终实现了dit基因在卷枝毛霉MU402中的表达，过表达菌株Mc‑Dit胞内油脂脂肪酸组成变化不大，但在过表达菌株Mc‑Dit菌株油脂总脂肪酸含量提了33.76%，胞内油脂含量最多可以达到细胞干重的17.67%。
卷枝毛霉二羧酸转运体胞内油脂表达菌株基因工程领域缺陷型菌株脂肪酸组成基因整合同源重组重组菌株总脂肪酸基因组整合型基因干重菌株毛霉油卷质粒克隆高产细胞转化

[发明专利]一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ-亚麻酸产量的方法-CN202210073727.7在审
发明人：张怀渊;周长春;宋元达;房华;黄敬尊;张旭;左权 -专利权人：山东和众康源生物科技有限公司
申请日： 2022-01-21 - 公布日： 2022-04-29 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于提高卷枝毛霉WJ11产γ‑亚麻酸产量的方法，包括以下步骤：步骤1、菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；步骤2、制备PDA斜面培养基；步骤3、制备摇瓶基；步骤4、制备液体培养基；步骤5、固体原料发酵；步骤6、孢子分离；本发明依次进行菌种分离筛选，选用的菌种为卷枝毛霉WJ11；制备PDA斜面培养基；制备摇瓶基；制备液体培养基；固体原料发酵；孢子分离；本发明使用卷枝毛霉WJ11菌体，并采用固体原料发酵方式，与液态发酵相比，油脂含量偏低，而亚麻酸的比例更高，液态发酵亚麻酸比例只有12‑14％，而固态发酵孢子的亚麻酸比例能达到20％以上，提高了亚麻酸的产量。
一种用于提高毛霉 wj11 亚麻产量方法

[发明专利]一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用-CN201410802019.8在审
发明人：宋元达;唐鑫;张怀渊 -专利权人：江南大学
申请日： 2014-12-18 - 公布日： 2015-09-30 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：一株能够高产脂的卷枝毛霉及应用。本发明公开了一株卷枝毛霉(Mucor circinellodies)WJ11及其应用，即利用该菌生产油脂的方法。步骤如下：菌种活化得到活化菌种液后在无菌的条件下，进行种子培养得到种子培养液后发酵培养得发酵培养液过滤后冻干至恒重，得到含油脂的卷枝毛霉WJ11的干菌体后将其研磨，采用氯仿甲醇法提取油脂。本发明的这株卷枝毛霉WJ11具有生长速率快，脂肪酸含量高，达到生物量的30～40％，其脂肪酸含量是对照菌株的2～3倍，生化分析结果显示其与脂肪酸积累相关的酶活显著高于对照组。所述的这株卷枝毛霉用于微生物产油工业以及微生物油脂积累分析，都具有非常广泛的应用前景。
能够高产毛霉应用

[发明专利]一种用于提高卷枝毛霉产油量的碳四二羧酸转运体-CN201811402944.6在审
发明人：宋元达;杨俊换;杨武 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于提高卷枝毛霉产油量的碳四二羧酸转运体，属于基因工程领域，本发明从高产油卷枝毛霉WJ11克隆获得碳四二羧酸转运体C4‑dicarboxylate/malic acid transporter基因，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Mu402中，通过同源重组将c4mt基因整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mu‑C4mt，最终实现了c4mt基因在卷枝毛霉中的表达，过表达菌株Mu‑C4mt胞内油脂脂肪酸组成变化不大，但在过表达菌株Mc‑C4mt菌株油脂总脂肪酸含量提了25.30%，胞内油脂含量最多可以达到细胞干重的16.34%。
卷枝毛霉转运体羧酸胞内油脂表达菌株基因工程领域缺陷型菌株脂肪酸组成基因整合同源重组重组菌株总脂肪酸基因组整合型基因干重菌株毛霉油卷质粒克隆高产细胞转化

[发明专利]一种用于提高卷枝毛霉产γ-亚麻酸产量的发酵培养基及用途-CN201310654941.2有效
发明人：宋元达;唐鑫;陈卫;陈海琴;张怀渊 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-12-05 - 公布日： 2014-03-19 - 主分类号： C12P7/64 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于提高卷枝毛霉CBS108.16产γ-亚麻酸产量的发酵培养基，它含有酪氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸的氨基酸氮源，还涉及使用所述发酵培养基提高卷枝毛霉CBS108.16产γ-亚麻酸产量的方法。采用本发明得到的卷枝毛霉CBS108.16菌体生物量达到16.5～19.8g/L，比对照组提高25～52%；脂肪酸含量达到24～35%，比对照组提高11～48%；发酵液中γ-亚麻酸含量达到810～1300mg
一种用于提高毛霉亚麻产量发酵培养基用途

[发明专利]一种产双高-γ-亚麻酸卷枝毛霉细胞工厂的构建方法及发酵技术-CN201811510570.X有效
发明人：宋元达;可汗;杨俊换;杨武 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2018-12-11 - 公布日： 2022-09-23 - 主分类号： C12P7/6427 文献下载
摘要：本发明涉及一种产双高‑γ‑亚麻酸卷枝毛霉细胞工厂的构建方法及发酵技术，属于基因工程领域，本发明从高山被孢霉克隆获得γ‑亚麻酸延长酶基因glelo，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Mu402中，通过同源重组将glelo基因整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mc‑glelo，最终实现了glelo基因在卷枝毛霉中的表达，重组菌株Mc‑glelo中油脂含量与对照菌Mc1552相比无显著差异，然而其油脂组成变化较大，而且在表达菌株Mc‑glelo油脂中出现双高‑γ‑亚麻酸（DGLA），其含量达到了总脂肪酸含量的5.7%。优化发酵条件并添加前体脂肪酸情况下，DGLA含量达7.6%。重组新菌种于2018年6月20日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心。
一种产双高亚麻酸卷枝毛霉细胞工厂构建方法发酵技术

[发明专利]一种产十八碳四烯酸卷枝毛霉细胞工厂的构建及其发酵技术-CN201811510571.4有效
发明人：宋元达;可汗;杨俊换;杨武;李少琦 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2018-12-11 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明涉及一种产十八碳四烯酸SDA卷枝毛霉细胞工厂的构建及其发酵技术，属于基因工程领域，本发明从高山被孢霉克隆获得Δ15 Des基因，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Mu402中，通过同源重组将Δ15 Des整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mc‑Δ15，最终实现了Δ15Des基因在卷枝毛霉中的表达，重组菌株Mc‑Δ15中油脂含量与对照菌Mc1552相比无显著差异，然而其油脂组成变化较大，而且在表达菌株Mc‑Δ15油脂中出现SDA，其含量达到总脂肪酸的5.2%。优化发酵条件并添加前体脂肪酸情况下，SDA含量达8.3%。重组新菌种于2018年6月20日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心。
一种十八碳四烯酸卷枝毛霉细胞工厂构建及其发酵技术

[发明专利]非从头合成的高产脂卷枝毛霉重组菌的构建方法、该方法构建的重组菌及应用-CN202011299212.6有效
发明人：宋元达;孙彩丽;张怀渊;杨武;陈美玲 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2020-11-19 - 公布日： 2022-04-08 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种非从头合成的高产脂卷枝毛霉重组菌的构建方法、该方法构建的重组菌及应用，属于基因工程领域。本发明非从头合成的高产脂卷枝毛霉重组菌的构建方法，是将二酰甘油酰基转移酶DGAT的核苷酸序列连接至整合型质粒pMAT2075，该重组质粒经电转化至尿嘧啶缺陷型卷枝毛霉的原生质体中，筛选阳性克隆，使二酰甘油酰基转移酶DGAT在尿嘧啶缺陷型卷枝毛霉中过表达，即获得所述非从头合成的高产脂卷枝毛霉重组菌。
从头合成高产脂卷枝毛霉重组构建方法应用

[发明专利]一种提高卷枝毛霉WJ11中链脂肪酸产量的方法-CN202010772667.9有效
发明人：张怀渊;高萌;宋元达;王瑞雪;赵燕磊;辛菲菲 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2020-08-04 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12P7/6409 文献下载
摘要：本发明是一种促进卷枝毛霉WJ11生产中链脂肪酸的方法，属于微生物油脂领域。本发明利用在发酵培养基中添加氯化钴溶液，改变了卷枝毛霉的油脂组成，使其中链脂肪酸的占比增加，发酵条件为：添加氯化钴的终浓度为2 mmol/L，添加时间为接种后的24 h，接入种子液的接种量为10%，发酵罐转速为700 rpm，pH为6.2，空气流速为1 vvm，发酵温度为28℃，发酵时间为120 h，最终中链脂肪酸的含量从1.31%提高到了15.29%，其产量为1109.74 mg/L。
一种提高毛霉 wj11 脂肪酸产量方法

[发明专利]使用外源单链RNA在卷枝毛霉休眠孢子中表达蛋白质的方法-CN201610812875.0在审
发明人：林峻 -专利权人：福州大学
申请日： 2016-09-09 - 公布日： 2017-02-01 - 主分类号： C12N15/87 文献下载
摘要：本发明公开了一种使用外源单链RNA在卷枝毛霉休眠孢子中表达蛋白质的方法，包括卷枝毛霉培养和孢子收集、卷枝毛霉孢子预处理以及使用HDEN法电击卷枝毛霉孢子三个步骤，该方法绕过真菌孢子萌发这个步骤，采用HDEN电转化技术，将体外的单链编码蛋白RNA递送穿过细胞壁和细胞膜，在卷枝毛霉休眠孢子内表达蛋白质。
使用外源单链 rna 毛霉休眠孢子表达蛋白质方法

[发明专利]让外源DNA穿越卷枝毛霉未萌发孢子细胞壁和细胞膜的方法-CN201610812876.5在审
发明人：林峻 -专利权人：福州大学
申请日： 2016-09-09 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种让外源DNA穿越卷枝毛霉未萌发孢子细胞壁和细胞膜的方法，包括卷枝毛霉培养和孢子收集、卷枝毛霉孢子预处理以及使用HDEN法电击卷枝毛霉孢子三个步骤，得到导入待转化质粒的卷枝毛霉孢子。本发明用未萌发的孢子来作为导入外源分子的起始材料，并且应用HDEN电转化技术将外源DNA导入卷枝毛霉休眠孢子，可以省去做孢子萌发这一复杂的步骤，省去传统方法中制备原生质体或农杆菌转化的步骤等，并且转化率高
让外源 dna 穿越毛霉萌发孢子细胞壁细胞膜方法

[发明专利]一种提高卷枝毛霉产油量的制备方法-CN201710604454.3有效
发明人：宋元达;杨俊换;亢新鑫 -专利权人：山东理工大学
申请日： 2017-07-24 - 公布日： 2020-08-07 - 主分类号： C12N1/15 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高卷枝毛霉油脂产量的制备方法，属于基因工程领域，本发明从卷枝毛霉菌株WJ11克隆获得三羧酸转运体TCT基因，连接至整合型质粒pMAT1552上，转化到卷枝毛霉缺陷型菌株Pleu‑Mu402中，通过同源重组将TCT基因整合到卷枝毛霉的基因组上，得到重组菌株Mutct，最终实现了TCT基因在卷枝毛霉中的过量表达，重组菌株Mutct中油脂含量比对照菌Mc1552提高了45.1%，胞内油脂含量可以达到总生物量的
一种提高毛霉产油制备方法

[发明专利]一种轻型可卷式扫把-CN201610519175.2在审
发明人：薛保堂 -专利权人：薛保堂
申请日： 2016-07-05 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： A47L13/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种轻型可卷式扫把，包括可卷杆、第一固定凸板、第二固定凸板、第三固定凸板、承台、承台口、扣板、扫枝固定条、扫枝、手握杆、第二手握杆，第一固定凸板通过可卷杆与第二固定凸板连接等，本发明的有益效果利用可卷杆、第一固定凸板、第二固定凸板、第三固定凸板、承台、承台口、扣板、扫枝固定条、扫枝、手握杆、第二手握杆等结构制成一种轻型可卷式扫把，扫把可卷起来使用，体型较小方便清理狭窄的地方，且可用拆卷方式拆卷拆卸下来，塑胶丝为扫枝，清扫干净、耐用。
一种轻型可卷式扫把

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