本发明涉及一种β‑半乳糖苷酶及其应用，该β‑半乳糖苷酶来自发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum 9‑4，所述β‑半乳糖苷酶的基因，由编码α亚基的基因和编码β亚基的基因组成，所述编码α亚基的基因的核苷酸序列如所述的β‑半乳糖苷酶基因编码的β‑半乳糖苷酶，由α亚基和β亚基组成，该酶的α亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述β亚基的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。本发明的β‑半乳糖苷酶具有高转糖苷活性，能够应用于半乳糖基寡糖的酶法生产，尤其是β‑半乳糖苷酶在合成半乳糖基海藻糖中的应用。
