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- [发明专利]一种萤火虫荧光素酶及制备方法-CN200910115943.8无效
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吴一凡;王滨
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苏州浦隆生物有限公司
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2009-08-07
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2010-01-27
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C12N9/02
- 本发明公开了一种新的萤火虫荧光素酶,该酶是通过在自然的荧光素酶蛋白的N端加了一段氨基酸片断形成的,这样该酶比自然提取到的荧光素酶或者重组的自然荧光素酶具有更高的酶活性稳定性,本发明还公开了一种编码萤火虫荧光素酶的DNA分子以及该荧光素酶的制备方法,利用荧光素酶DNA分子构建重组表达载体,将表达载体转化入宿主细胞,形成转化体,在转化体中诱导表达得到重组荧光素酶,然后通过高盐沉淀进行分离纯化。在高盐条件下沉淀出重组荧光素酶后,通过离心即可分离纯化出该荧光素酶,则该酶的制备方法操作简单,省时,效率高。
- 一种萤火虫荧光制备方法
- [发明专利]一种萤火虫荧光素酶基因及其应用-CN201310172456.1有效
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李润生
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李润生
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2013-05-10
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2013-09-04
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C12N15/53
- 本发明公开了一种萤火虫荧光素酶基因及其应用,是通过将野生型的萤火虫荧光素酶基因的第31位赖氨酸突变为丙氨酸后得到的mutLuc基因,该种萤火虫荧光素酶基因用于生产萤火虫荧光素酶中的应用。与现有荧光素酶生产方法相比,本发明由于突变了野生型萤火虫荧光素酶基因以及优化了Luc的密码子,使得该突变的萤火虫荧光素酶具有易于纯化,得率高(每升发酵菌获得酶蛋白大于5mg),酶纯度高(酶比活力≥1×1011RUL/mg蛋白),活性高以及稳定性强等特点,是一种高效生产萤火虫荧光素酶的方法,适合工业生产,个体化诊断中应用。
- 一种萤火虫荧光基因及其应用
- [发明专利]新型酶-CN00817736.8无效
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D·J·斯奎雷尔;M·J·莫菲;R·L·普里斯;P·J·怀特;T·L·维利
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英国国防部
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2000-10-26
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2003-04-23
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C12N15/53
- 一种具有荧光素酶活性而且与野生型荧光素酶具有至少60%相似性的重组蛋白,其中在所述酶的序列中,在对应于Photinuspyralis荧光素酶357位上残基的氨基酸残基与对应的野生型荧光素酶相比是突变的,使得与对应的野生型荧光素酶相比所述荧光素酶能够发不同波长的光和/或与对应的野生型荧光素酶相比所述酶的热稳定性增强。一般而言,对应于Photinuspyralis荧光素酶357位的残基由一个酸性氨基酸变为一个非酸性氨基酸,优选为不带电荷的极性氨基酸,例如酪氨酸。依照本发明的突变型荧光素酶能够产生发射光的大的波长移动(50nm),而且具有很好的热稳定性。产生的色位移通过加入辅酶A可以被逆转。这些特性使所述突变体在各种各样的检测中特别有用。
- 新型
- [发明专利]一种ATP荧光检测方法-CN201610319763.1在审
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孙晓晖;方柏山
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孙晓晖
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2016-05-13
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2016-10-12
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G01N21/76
- 本发明涉及产品检测技术领域,提供一种荧光强度强、检测灵敏、单位时间内荧光反应速率高、底物循环利用、荧光信号输出周期增加的ATP荧光检测方法,包括以下处理步骤:(1)样品采集;(2)在反应容器中加入萤火虫荧光素酶及萤火虫荧光素再生酶荧光素再生酶复合结构、反应底物萤火虫荧光素、镁离子、半胱氨酸,通入适量的溶剂,充分混匀溶解,得到反应体系混合物溶液;(3)底物混合物溶液充分溶解待测样品中的ATP,在大气氧气条件下,促发反应,产生氧化态荧光素及光;(4)氧化态荧光素在萤火虫荧光素再生酶荧光素再生酶及底物半胱氨酸作用下,被还原为萤火虫荧光素,促使反应继续进行;(5)采集光信号:将步骤(3)反应产生的光进行采集。
- 一种atp荧光检测方法
- [发明专利]一种制备萤火虫荧光素酶的方法-CN200810114823.1无效
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林金明;肖勤
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清华大学
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2008-06-12
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2008-11-12
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C12N9/02
- 本发明公开了一种制备萤火虫荧光素酶的方法。将萤火虫荧光素酶基因插入原核表达载体的多克隆位点,得到含有萤火虫荧光素酶基因的重组表达载体,将该重组表达载体导入大肠杆菌细胞,得到含有该重组表达载体的重组细胞,培养该重组细胞,表达得到萤火虫荧光素酶。本发明的制备萤火虫荧光素酶的方法具有过程简单、生长周期短、成本低廉、易于纯化、酶活性高和性能稳定等优点。可缓解虫荧光素酶主要依赖进口的局面,同时可以促进荧光法微生物快速检测系统的开发以及虫荧光素酶在医学、环境科学等方面的应用,为ATP生物发光微生物的快速检测以及其它方面的应用提供优质的酶制剂。
- 一种制备萤火虫荧光方法
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