本发明属于基因工程技术领域,公开了一种酶活和最适温度提高的脂肪酶融合蛋白,所述脂肪酶融合蛋白是在SEQ ID NO.2所示的野生型脂肪酶酶基础上,将RZⅠ蛋白添加到脂肪酶N端获得的,所述脂肪酶融合蛋白的氨基酸序列如本发明利用蛋白质融合技术,在体外对扩展青霉来源的脂肪酶进行蛋白质融合,获得酶活和最适温度提高的脂肪酶融合蛋白。在国标法的反应条件下,RZⅠ‑WT的比酶活为188U/G,野生型脂肪酶WT的比酶活为138U/g,提高了36%。RZⅠ‑WT最适反应温度提高了5℃,最高比酶活为206U/g。
本发明公开了一种含有新型前导肽的米黑根毛霉脂肪酶基因及其在毕赤酵母中的表达。含有新型前导肽的米黑根毛霉脂肪酶基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过前导肽的改变实现了米黑根毛霉脂肪酶酶活和酶产量的提高,其酶活是野生型米黑根毛霉脂肪酶前导肽存在下的3倍,摇瓶发酵水平达到100U/ml,这在米黑根毛霉脂肪酶的研究领域还属于首次。米黑根毛霉脂肪酶属于真菌脂肪酶,本发明采用毕赤酵母表达系统以及按照毕赤酵母喜好性优化密码子后的脂肪酶基因,更有利于真菌脂肪酶的翻译后折叠、修饰及高效分泌。采用pPIC9K质粒作为表达载体,其含有的高效甲醇诱导强启动子有利于脂肪酶基因高效快速表达,能提高酶活和酶产量。
本发明公开了超嗜热脂肪酶LipH及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipH为A1)‑A3)中的任一蛋白质:A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑468位的蛋白质;A3)氨基酸序列是SEQ ID该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为80℃,酶反应的最适pH为9,在37℃、pH值为9‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9条件下的脂肪酶酶活的84%以上,在80‑90℃、pH值为9条件下的脂肪酶酶活是在80℃、pH值为9条件下的脂肪酶酶活的87%以上。
本发明公开了超嗜热脂肪酶LipD及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipD为A1)‑A3)中的任一蛋白质:A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑598位的蛋白质;A3)氨基酸序列是SEQ ID该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为80℃,酶反应的最适pH为9.5,在37℃、pH值为9‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的94%以上,在80‑90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活是在80℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的87%以上。
本发明公开了超嗜热脂肪酶LipP及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipP为A1)‑A3)中的任一蛋白质:A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑588位的蛋白质;A3)氨基酸序列是SEQ ID该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为90℃,酶反应的最适pH为9.5,在37℃、pH值为9.5‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的82%以上,在80‑90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活是在90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的96%以上。
本发明公开了超嗜热脂肪酶LipL及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipL为A1)‑A3)中的任一蛋白质:A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑675位的蛋白质;A3)氨基酸序列是SEQ ID该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为70℃,酶反应的最适pH为9.5,在37℃、pH值为9‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的80%以上,在70‑90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活是在70℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的97%以上。
本发明公开了超嗜热脂肪酶LipK及其相关生物材料与应用。该超嗜热脂肪酶LipK为A1)‑A3)中的任一蛋白质:A1)氨基酸序列是SEQ ID No.2的蛋白质;A2)氨基酸序列是SEQ ID No.2的第53‑587位的蛋白质;A3)氨基酸序列是SEQ ID该超嗜热脂肪酶的酶反应的最适温度为80℃,酶反应的最适pH为9.5,在37℃、pH值为9‑10条件下的脂肪酶酶活是在37℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的92%以上,在80‑90℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活是在80℃、pH值为9.5条件下的脂肪酶酶活的90%以上。