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[发明专利]一种诱导石榴枯萎病菌产生致病性分泌蛋白的方法-CN201210577009.X无效
发明人：余磊;赵建荣;徐胜光;吴旭;苏源;刘佳妮;陈泽斌 -专利权人：昆明学院
申请日： 2012-12-27 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种诱导石榴枯萎病菌产生致病性分泌蛋白的方法，属于生物技术领域。的蔗糖液体培养基，26℃，170rpm振荡培养72小时；蔗糖液体培养基成分组成：蔗糖20g/L，酵母提取物5g/L，H2O 1L，pH 6.3； (3) 将培养好的菌液抽滤，采用硫酸铵沉淀法沉淀后得到石榴枯萎病菌分泌蛋白的提取物，透析后冻干保存，-20℃保存，即得石榴枯萎病菌胞外分泌蛋白样品。本发明具有工艺简单、成本低，石榴枯萎病菌胞外分泌蛋白样品能用于后续对其进行功能测定和双向电泳分析，具有较大的实际应用价值。
一种诱导石榴枯萎病菌产生致病性分泌蛋白方法

[发明专利]一种基于血液或外分泌液颜色识别的检测装置-CN202010692136.9在审
发明人：高竞;肖永强;王秀娟 -专利权人：宝鸡市中心医院
申请日： 2020-07-17 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： G01N33/52 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于血液或外分泌液颜色识别的检测装置，包括固定皿、比色卡和样品板，所述比色卡和样品板分别设置在所述固定皿的两侧，所述样品板上设置有至少一个样品槽，所述样品槽用于存放所述血液和/或外分泌液，所述比色卡上设置有与所述血液和/或外分泌液对应的颜色；该检测装置，能够直接将血液或外分泌液直接置于所述样品槽中，并根据比色卡确定样品槽中血液或外分泌液的颜色，再根据血液或外分泌液的颜色使用者可实现自己初步预警，能够更快的发现自身疾病隐患，避免造成病情的延误错过最佳的治疗时间；该检测装置能够简便、快捷的实现自测预警，并能够为医务人员对血液、外分泌液的颜色识别提供依据，提高判断准确性。
一种基于血液外分泌颜色识别检测装置

[发明专利]一种高效表达与制备外分泌型人源CA125的方法-CN201610321064.0在审
发明人：欧文斌;孟凡国;刘丽;严子琴;李海龙 -专利权人：浙江理工大学;浙江清华长三角研究院
申请日： 2016-05-16 - 公布日： 2016-09-21 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：一种高效表达与制备外分泌型人源CA125的方法，该方法主要包括如下三个方面的内容：(1)利用基因合成技术合成CA125的DNA序列，再采用基因克隆和分子生物学方法构建酵母重组表达质粒PpICZαA‑CA125，并进行质粒抽提；(2)使用毕赤酵母表达系统体外诱导表达分泌型CA125重组蛋白，并通过优化表达时间、诱导剂添加量等条件得出最佳诱导条件；(3)优化硫酸铵分级沉淀,从发酵液上清中分离纯化得到分泌到胞外的CA125重组蛋白，在55％硫酸铵浓度下目的蛋白CA125几乎全部析出，本发明将纯化得到的分泌重组蛋白CA125用临床检测电化学发光法检测其生物活性，其值达802100U/mL。
一种高效表达制备外分泌型人源 ca125 方法

[发明专利]一种在复合绝缘材料表面养殖藻类的方法-CN201610920830.5在审
发明人：杨世芳;贾志东;欧阳小刚;刘芮彤;范维;杨滢璇;杨璐羽 -专利权人：清华大学深圳研究生院;国网辽宁省电力有限公司电力科学研究院;国家电网公司
申请日： 2016-10-20 - 公布日： 2017-03-15 - 主分类号： A01G33/00 文献下载
摘要：，对包含藻类的混合污秽进行采集，剔除灰分后用培养液储存混合污秽；S2、剔除混合污秽中的土壤、菌类以及培养液中的盐分，对藻类进行提纯，得到纯化藻液后，再加入培养液进行培养；S3、从经灭活处理的藻类上提取胞外分泌物(EOM)，将胞外分泌物铺设在预先准备好的复合绝缘材料的表面；S4、测量步骤S2获得的藻液的藻细胞密度，根据所需的细胞数取定量藻液，将藻类接种到经步骤S3处理的复合绝缘材料的表面上，使其在复合绝缘材料表面生长
一种复合绝缘材料表面养殖藻类方法

[发明专利]一种核酸构建物以及制备方法-CN202111667838.2在审
发明人：郭敏;胡鼎楷;张俊;徐丽琼;于雪 -专利权人：康码（上海）生物科技有限公司
申请日： 2021-12-31 - 公布日： 2022-03-22 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：能适应多种大小的小型多肽胞外分泌表达，并能实践不破坏肽链N端功能性且能精确地切割，并维持高度切割阳性率，使得通过细胞表达的小分子短链多肽的培养体系无须萃取或额外加工，就能对小分子短链多肽的高产量和高精度生产，降低各式蛋白的生产或使用造成局限和门坎，加大小分子短链多肽的临床应用；能适应小型多肽胞外分泌表达，并能实践不破坏肽链N端功能性且能精确切割，维持高度切割阳性率。
一种核酸构建以及制备方法

[发明专利]通过N端的PI值控制生产可溶性重组蛋白-CN200880125469.0无效
发明人：李相俊;金英玉;南宝惠 -专利权人：国立水产科学院;贝克斯克公司
申请日： 2008-04-17 - 公布日： 2011-01-19 - 主分类号： C12N15/64 文献下载
摘要：本发明涉及利用具有受控pI值的包含信号序列(方向信号)的N区的多肽片段或其变体和/或由具有受控pI值的亲水性多肽构成的分泌增强子提高重组异源蛋白分泌效率的方法。本发明的方法不仅可以有效用于通过防止不溶性沉淀物的沉淀和通过增加重组蛋白的胞外或周质外分泌效率来生产重组异源蛋白，而且可以有效用于通过利用强分泌增强子增加膜通透性来转导有效治疗性蛋白。
通过 pi 控制生产可溶性重组蛋白

[发明专利]一种胞外高表达克氏原螯虾细胞色素C氧化酶的基因工程菌-CN201510651867.8在审
发明人：管政兵;水燕;廖祥儒;蔡宇杰;廖元元 -专利权人：江南大学
申请日： 2015-10-10 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效胞外表达生产克氏原螯虾细胞色素C氧化酶(Cytochrome C oxidase)的方法，属于基因工程技术领域。本发明以克氏原螯虾Cytochrome C oxidase基因，构建分泌表达载体pMA0911-Cox并转化枯草芽孢杆菌表达菌株WB600中，通过培养条件优化，实现了高效胞外分泌表达。
一种胞外高表达克氏原螯虾细胞色素氧化酶基因工程

[发明专利]耐高温木聚糖酶基因在乳酸克鲁维酵母中的表达-CN200710120623.2有效
发明人：李颖;印铁;关国华;王珍芳;李季伦 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2007-08-22 - 公布日： 2009-02-25 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供了一种耐高温木聚糖酶分泌表达载体以及通过乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)高效表达耐高温木聚糖酶的方法。采用本发明所述的方法，使得表达的木聚糖酶大部分分泌到细胞外，从而降低了分离纯化成本，而且大大提高了表达效率；其中在摇瓶培养的条件下，以半乳糖诱导培养时，胞外分泌酶量可达70mg/L，以RBB－木聚糖为底物时
耐高温聚糖基因乳酸克鲁酵母中的表达

[发明专利]一种不受甘油和葡萄糖抑制的可诱导启动子及利用该启动子构建的毕赤酵母表达载体-CN201911045712.4在审
发明人：黄义德;林尧;张亚菲;洪文柄 -专利权人：福建师范大学
申请日： 2019-10-30 - 公布日： 2020-01-14 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：利用FDH1基因启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体包括胞内表达和胞外分泌型表达两种。
基因启动子毕赤酵母表达载体可诱导启动子驱动外源基因胞外分泌型葡萄糖抑制启动子构建胞内表达多启动子外源蛋白转录启动子甘油构建

[发明专利]载体克隆表达区基因和蛋白分泌型哺乳动物细胞表达载体-CN201410109231.6在审
发明人：徐明恺;邹瑾;孟北乾;李旭;张惠文 -专利权人：中国科学院沈阳应用生态研究所
申请日： 2014-03-21 - 公布日： 2015-09-23 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明涉及基因重组和蛋白表达领域，具体说是一种蛋白分泌型哺乳动物细胞表达载体克隆表达区基因的设计及其应用，设计并合成一种载体克隆表达区基因，其具有序列表SEQ ID NO：1中碱基序列；将该基因片段克隆连接至哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1的Nhe I和Hind III限制性内切酶识别位点区间，构建了一种新型表达载体pcDNA3.1-secreting，该载体可使编码基因连接于多克隆位点处的外源蛋白在哺乳动物宿主细胞中以胞外分泌的形式表达出来，分泌于细胞培养液中，便于收集和纯化。
载体克隆表达基因蛋白分泌哺乳动物细胞

[发明专利]一种基于芽孢杆菌表达系统高效表达灵杆菌非特异性核酸酶的方法-CN201910212588.X在审
发明人：龚雪梅;薛勇;罗志丹;胡艳红;张慧铭;韩挺翰;张晨蕾 -专利权人：淮海工学院;江苏愚公生命科技有限公司
申请日： 2019-03-20 - 公布日： 2019-06-07 - 主分类号： C12N15/75 文献下载
摘要：本发明公开一种基于芽孢杆菌表达系统高效表达灵杆菌非特异性核酸酶的方法，其特征在于：包括以芽孢杆菌作为宿主表达体系，利用芽孢杆菌胞外分泌能力实现灵杆菌非特异性核酸酶的高效表达；本发明重组表达出的灵杆菌非特异性核酸酶，比活力是目前商业化产品的3倍，本发明选用的芽孢杆菌分泌表达系统，从根本上解决了由其他表达系统自身特性所引入的内毒素及糖基化修饰等影响酶活或限制其应用的缺陷，高效的分泌型表达无需破碎细胞，纯化步骤更为简便
非特异性核酸酶灵杆菌高效表达芽孢杆菌芽孢杆菌表达系统内毒素分泌表达系统分泌型表达规模性生产糖基化修饰胞外分泌表达系统破碎细胞宿主表达线性放大重组表达酶活引入应用

[发明专利]提高出芽短梗霉静息细胞生物合成普鲁兰多糖产量的方法-CN201410776656.2在审
发明人：卫功元;巨晓敏;王大慧 -专利权人：苏州大学
申请日： 2014-12-16 - 公布日： 2015-03-25 - 主分类号： C12P19/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种普鲁兰多糖的制备方法，具体公开了一种提高出芽短梗霉静息细胞生物合成普鲁兰多糖产量的方法，包括利用出芽短梗霉静息细胞生物转化合成普鲁兰多糖，在所述利用出芽短梗霉静息细胞生物转化合成普鲁兰多糖的转化液中添加斯潘类非离子型表面活性剂，斯潘类非离子型表面活性剂在转化液中的浓度为1～30g/L。本发明通过向转化液中添加斯潘类非离子型表面活性剂，促进了胞内合成的多糖向胞外分泌，缩短了转化时间，提高了普鲁兰生产效率。
提高出芽短梗霉静息细胞生物合成普鲁兰多糖产量方法

[发明专利]参与酯酶分泌机制的基因-CN96102722.3无效
发明人：柴谷武尔;赤浩之;河合衣里 -专利权人：田边制药株式会社
申请日： 1996-03-25 - 公布日： 1997-01-29 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：编码参与来自沙雷氏菌属微生物的酯酶的分泌机制的多肽的基因，包括通过将该基因插入一载体质粒所制得的质粒的重组质粒，用该重组质粒转化的微生物，以及一包括在一培养基中培养上述转化微生物及收集在细胞内外产生的酯酶的用于酯酶产生的方法该转化微生物有显著优越的向胞外分泌酯酶的能力。
参与分泌机制基因

[发明专利]阻断HIV-1膜融合的小环型DNA重组载体及其应用-CN201210048534.2有效
发明人：田波;潘煦文;孟颂东 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2012-02-28 - 公布日： 2013-09-11 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明提供一种能真核外分泌表达HIV-1膜融合抑制蛋白HR212的小环型DNA重组载体，其包含编码HR212的核苷酸序列和小环DNA载体。本发明还提供阻断HIV-1膜融合过程的小环型DNA基因治疗剂，其包含能真核外分泌表达HIV-1膜融合抑制蛋白HR212的小环型DNA重组载体，其有效成分是编码七肽重复三螺旋蛋白HR212的核苷酸，该核苷酸通过小环型DNA载体方式，转染真核细胞后，在细胞内表达并通过外分泌或者细胞外膜表达方式释放到细胞外，通过阻断病毒进入宿主细胞过程，发挥抑制HIV-1病毒感染的作用。本发明还提供编码七肽重复三螺旋蛋白HR212的小环型DNA重组载体在制备用于抗HIV-1的感染的基因治疗剂中的应用。
阻断 hiv 融合小环 dna 重组载体及其应用

[发明专利]一种改造信号肽提高肠激酶分泌表达量的方法-CN201910308247.2有效
发明人：张昊宁;康振;陈松;梁启星;堵国成;汤传根 -专利权人：美药星（南京）制药有限公司;江南大学;南京汉欣医药科技有限公司
申请日： 2019-04-17 - 公布日： 2020-09-08 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种改造信号肽提高肠激酶分泌表达量的方法，属于基因工程技术领域。本发明是以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115作为出发菌株，通过同源重组的方法替换掉α‑factor信号肽的Pre‑region区域，提高肠激酶分泌效率的一种方法。本发明的Sekd信号肽与原始的α‑factor信号肽相比，酶活提高4.2倍，解决了肠激酶胞外分泌量低的问题，为进一步提高工业化生产肠激酶的表达量奠定了基础。
一种改造信号肽提高肠激酶分泌表达方法