本发明属于细胞免疫治疗技术领域,公开了一种肿瘤疫苗的制备方法及使用该方法制备的肿瘤疫苗。本发明将SEQ ID No.3~12所示的序列顺序串联,相邻两个序列间含有接头序列,5’端插入如SEQ ID No.1所示的信号肽序列或与其具有80%以上同源性的序列,在末尾的所述肿瘤抗原的基因序列的3’端插入如SEQ ID No.2所示的MHC转运信号序列或与其具有80%以上同源性的序列,作为肿瘤抗原,将编码其的基因序列克隆到病毒表达载体上,制备重组病毒,得到的肿瘤疫苗具有强大的免疫刺激活性,同时可降低对免疫佐剂的需求