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[发明专利]一种检测外泌体的方法及体系-CN201710036668.5在审
发明人：周小进;何林富;王义 -专利权人：上海良润生物医药科技有限公司
申请日： 2017-01-18 - 公布日： 2017-06-13 - 主分类号： G01N33/574 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测外泌体的方法及体系，所述方法包括如下步骤A.采集含有外泌体的生物样本，去除细胞，得到外泌体分析液；对外泌体进行大小鉴定、计数；取外泌体，进行蛋白定量；B.用外泌体检测体系，测定上述外泌体分析液中的外泌体含量；C.采用外泌体CEA检测体系，测定上述外泌体分析液中的外泌体CEA含量，确定外泌体CEA阴性和外泌体CEA阳性的判断标准；D.基于步骤C的检测结果，将上述外泌体分析液中的外泌体区分为外泌体CEA阴性亚群和外泌体CEA阳性亚群；E.建立生物样本的外泌体分布模型。本发明的外泌体检测体系能够用于肠癌的诊断和病程监测。
一种检测外泌体方法体系

[发明专利]一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液-CN202311175966.4在审
发明人：葛啸虎;陆路;韩春乐;王淼;王娜 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-09-13 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液，外泌体保存液由果胶和/或海藻酸钠与磷酸盐缓冲液混合得到，使用时，先将外泌体保存液加热制成胶体溶液，再加入新鲜外泌体，封存后可在常温条件下长期保存外泌体，保护液能够提高外泌体体系带电量，避免外泌体在粒径、浓度和活性上的变化，保护外泌体的完整性，稳定性，使得外泌体能够长期保持其生物活性，并保持其内含物的稳定性。
一种提升外泌体稳定性方法保存

[发明专利]提取外泌体及外泌体蛋白的方法-CN201810287204.6有效
发明人：钱小红;张养军;高方园;焦丰龙;夏朝双;吕雅瑶;吴琼;余谦 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2018-04-03 - 公布日： 2021-12-24 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明公开了从人体体液或者细胞的培养液中提取外泌体及外泌体蛋白的方法。本发明提供的提取外泌体及外泌体蛋白的方法包括：向含有外泌体的待提取液中加入提取材料提取得到外泌体；提取材料为金属氧化物或修饰有所述金属氧化物的功能材料；金属氧化物能与磷酸根离子发生双配位作用；所述待提取液为来源于人体的体液、所述体液的稀释液或细胞的培养产物。实验证明，本发明的外泌体提取方法可以实现对人体体液或细胞的培养液中外泌体的高效提取，提取时间短，获得的外泌体纯度高，可以通过洗脱液洗脱获得完整的外泌体，并且所用提取材料可回收重复利用；另外提取所得外泌体蛋白可发现，所得外泌体蛋白种类多且与外泌体功能更密切。
提取外泌体蛋白方法

[发明专利]一种外泌体的纯化方法-CN202110598146.0在审
发明人：方杨武;王奕;李东升;于振亚 -专利权人：微纳核酸生物医药（广东）有限公司
申请日： 2021-05-28 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C12N5/00 文献下载
摘要：本发明提供一种外泌体的纯化方法，包括：(1)将富含外泌体的细胞培养液离心；(2)将步骤(1)得到的上清液和40％(w/v)碘帕醇溶液一起离心，得到外泌体粗提液；步骤(1)得到的上清液和碘帕醇的体积比为500～600:1；(3)将外泌体粗提液用缓冲溶液稀释4～6倍和外泌纯一起离心，外泌纯位于所述外泌体粗提液下部；外泌体粗提液和外泌纯的体积比为2:1～1.5；所述外泌纯为25～30％(w/v)的碘帕醇溶液；(本发明的纯化方法通过对一定浓度的碘帕醇经过超速离心可以很快速的形成连续密度梯度，且能够用于较高纯度外泌体的分离，有利于提高获得的外泌体的纯度。
一种外泌体纯化方法

[发明专利]一种外泌体保存液及外泌体的保存方法-CN202010138739.4有效
发明人：郑义;胡波;梁欣;杨菊红;林列坤;曾君;王长山;张慧 -专利权人：中国科学院大学深圳医院（光明）
申请日： 2020-03-03 - 公布日： 2022-01-25 - 主分类号： A01N1/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种外泌体保存液及外泌体的保存方法，属于生物技术领域。本发明提供的一种外泌体保存液，包括牛血清白蛋白、海藻糖、甘油、二甲基亚砜和磷酸盐缓冲液。本发明还提供保存外泌体的保存方法，包括将本发明所述外泌体保存液置于85℃～95℃加热10‑30min，形成胶体溶液，再将外泌体保存于胶体溶液中。本发明中的外泌体保存液能够长期保持外泌体的完整性、生物活性以及内含物稳定性。
一种外泌体保存方法

[发明专利]外泌体微球混悬液及其制备方法-CN202210343697.7在审
发明人：段春光;李征宇 -专利权人：深圳大学总医院
申请日： 2022-04-02 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本申请涉及生物提取工艺技术领域，尤其涉及一种外泌体微球混悬液及其制备方法。该外泌体微球混悬液的制备方法包括如下步骤：获取外泌体；配制多糖混悬液；将外泌体和多糖混悬液进行混合处理得到混合溶液，将混合溶液进行喷雾处理得到颗粒微球；将颗粒微球分散在胶原基质溶液中得到外泌体微球混悬液该制备方法工艺简单、成本低，而且可以得到性能稳定、缓释外泌体的外泌体微球混悬液，从而便于存储和保持外泌体的性能，因此在外泌体的存储和组织培养领域具有很好的应用前景。
外泌体微球混悬液及其制备方法

[发明专利]一种外泌体软膏组合物、一种外泌体软膏及其制备方法和应用-CN202210507177.5有效
发明人：张建民;王靓 -专利权人：国典（北京）医药科技有限公司
申请日： 2022-05-11 - 公布日： 2022-08-26 - 主分类号： A61K35/545 文献下载
摘要：本申请涉及医药技术领域，具体公开了一种外泌体软膏组合物、一种外泌体软膏及其制备方法和应用。以所述外泌体软膏组合物为基准，所述外泌体软膏组合物包括外泌体、缓冲液、丝素蛋白、水杨醇、β‑谷甾醇、油脂类透皮吸收剂、乳化剂。所述外泌体软膏是由所述外泌体软膏组合物制备得到。所述外泌体软膏的制备方法包括以下步骤：S1：将外泌体重悬于缓冲液中，得到外泌体悬液；S2：步骤S1得到的外泌体悬液和剩余组份混合，得到混合物；S3：步骤S2得到的混合物经过乳化，得到外泌体软膏。所述外泌体软膏在作为治疗或减轻炎症性皮肤疾病的药物中的应用。本申请提高了对银屑病的治疗效果。
一种外泌体软膏组合及其制备方法应用

[发明专利]一种分离外泌体的纯化方法及外泌体试剂盒-CN202211275324.7在审
发明人：田晓婷;孙美玉;王健;赵凯;李森朋;刘爽;李倩;郝润宇;孙辉 -专利权人：山东杰凯生物科技有限公司;安龄（上海）生物科技有限公司
申请日： 2022-10-18 - 公布日： 2022-12-09 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明公开了一种分离外泌体的纯化方法和外泌体试剂盒，包括：将含有外泌体的待提取液，经离心后，去除杂质，得到外泌体的初提液；将所述初提液采用中空纤维柱或者超滤膜包进行超滤浓缩，得到浓缩液；将所述浓缩液进行复合层析，得到的穿流液；将所述穿流液采用中空纤维柱或者超滤膜包浓缩换液后，得纯化后的外泌体溶液。根据本发明实施例的分离外泌体的纯化方法，能够满足大规模的外泌体制备的需求，也可以低成本高效率的获得高纯度的外泌体。
一种分离外泌体纯化方法试剂盒

[发明专利]一种自体干细胞与卵泡液复合外泌体的制备方法及其应用-CN202210311163.6在审
发明人：王红燕;周雪;王鹤颖;颜贝 -专利权人：宁夏医科大学总医院
申请日： 2022-03-28 - 公布日： 2022-07-05 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于外泌体技术领域，公开了一种自体干细胞与卵泡液复合外泌体的制备方法及其应用，其中所述的制备方法包括：S1.制备自体子宫内膜间充质干细胞外泌体；S2.制备卵泡液外泌体；S3.制备干细胞与卵泡液复合外泌体：按比例均匀混合步骤S1制备的子宫内膜间充质干细胞外泌体与步骤S2制备的卵泡液外泌体，混合后无菌分装并置于‑80℃冰箱中冻存；综上，本发明首次有效实现了子宫内膜间充质干细胞外泌体与卵泡液外泌体的联合应用；并且，基于本发明制备方法制备得到的复合外泌体具有纯度高、安全高效的优点，对于子宫内膜损伤修复还具有显著的靶向治疗效果。
一种干细胞卵泡复合外泌体制备方法及其应用

[发明专利]Annexin V-FITC外泌体捕获亲和磁珠、其制备方法及利用其提取外泌体的方法-CN201910772517.5有效
发明人：刘宏民;郑一超;范琦琦;赵丽娟;李迎迎 -专利权人：郑州大学
申请日： 2019-08-21 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N5/09 文献下载
摘要：本发明提供一种Annexin V‑FITC外泌体捕获亲和磁珠、其制备方法及提取方法，主要包括以下步骤：(1)表达和纯化Annexin V，制备Annexin V‑FITC，构建Annexin V‑FITC外泌体捕获亲和磁珠；(2)细胞培养上清液分离与浓缩：细胞培养后分离出细胞培养上清液，并经浓缩处理；(3)外泌体提取：将步骤(2)所得细胞培养上清液与外泌体捕获亲和磁珠共孵育，得到亲和磁珠‑外泌体复合物；(4)外泌体洗脱，将得到的亲和磁珠‑外泌体复合物与洗脱液共孵育，收集洗脱液，即为所提取分离的外泌体产物。本发明所述外泌体捕获亲和磁珠可重复使用，提取方便，且提取得到的外泌体纯度高。
annexin fitc 外泌体捕获亲和制备方法利用提取

[发明专利]一种集成化外泌体分离与检测微流控芯片及应用-CN201910291441.4在审
发明人：秦建华;陈雯雯;苏文涛 -专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日： 2019-04-12 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： B01L3/00 文献下载
摘要：一种集成化外泌体分离与检测微流控芯片及其应用，其构成如下：上层为试剂池层，中层为液路控制层，底层为反应池层；具体设计有下述结构：外泌体样本池、外泌体进样通道、外泌体染色一抗池、外泌体染色一抗进样通道、外泌体染色二抗池、外泌体染色二抗进样通道、显色液池、显色液进样通道、清洗缓冲液池、缓冲液进样通道、废液池、废液流出通道以及反应池。本发明通过泵阀控制系统对微流控芯片进行操控，将外泌体富集、一抗孵育、辣根过氧化酶标记的二抗孵育以及显色反应集成在同一芯片上。优化了外泌体提取检测流程，极大的提高了外泌体检测的效率，并且简化了人为操作的程序，取得了较好的外泌体分离检测效果。
一种集成化外分离检测微流控芯片应用

[发明专利]一种简便的外泌体提取方法-CN202011427150.2在审
发明人：陈小华;姚婷;陈金梅;张毅;臧国庆 -专利权人：上海市第六人民医院
申请日： 2020-12-09 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N5/0784 文献下载
摘要：本发明公开了一种简便的外泌体提取方法，包括以下步骤：(1)收集外泌体细胞上清液；(2)通过离心去除上清液中的细胞碎片；(3)将去除细胞碎片的上清液转移到超滤管中，使用超滤管富集外泌体；(4)使用PBS对超滤管中富集的外泌体进行洗涤；(5)对洗涤后的外泌体进行盐析，得到相对纯化的外泌体；(6)测定纯化后外泌体的浓度。该方法利用滤过膜截流外泌体，再通过盐析析出大分子量蛋白，解决了外泌体提取困难的问题：该方法可操作性强，真正解决了外泌体提取试剂昂贵、耗时、提取设备要求高、产物纯度不高等问题。因此，使用本发明所述提取方法大大简化了外泌体的提取方法、提高了外泌体的提取质量和提取效率。
一种简便外泌体提取方法

[发明专利]一种脐带间充质干细胞外泌体培养以及分离方法-CN201811409319.4在审
发明人：刘年 -专利权人：北京太东生物科技有限公司
申请日： 2018-11-23 - 公布日： 2019-02-19 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及外泌体富集和分离领域，特别涉及一种脐带间充质干细胞外泌体培养以及分离方法。本发明提供的脐带间充质干细胞外泌体培养方法，包括以下步骤：脐带间充质干细胞传代培养8‑14h，吸走培养液和未贴壁的细胞，并进行清洗，然后加入外泌体专用完全培养液进行培养；72‑96h后收集培养液到离心管中，得到富含间充质干细胞外泌体的培养液。本发明采用外泌体专用完全培养液对传代后培养一段时间的脐带间充质干细胞进行培养，有效提升外泌体的含量，得到较多的间充质干细胞外泌体。然后对富含间充质干细胞外泌体的培养液进行分离，得到间充质干细胞外泌体，方法简便易行，为间充质干细胞外泌体的应用提供良好的基础。
培养液脐带间充质干细胞间充质干细胞富含传代传代培养分离领域应用提供离心管富集贴壁清洗细胞

[发明专利]一种细胞外泌体的提取方法-CN201710810251.X在审
发明人：杨前;刁波;王刚;袁紫林;陈力 -专利权人：江苏国立生物研究院有限公司
申请日： 2017-09-11 - 公布日： 2018-11-23 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种细胞外泌体的提取方法，包括以下步骤：（1）上清液分离：将细胞培养后的培养基，离心去除杂质，分离出培养上清液；（2）一次提取：将步骤（1）所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；（3）二次提取：将步骤（2）所述含外泌体的浓缩液加入无菌PBS溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体本发明有效地提高细胞外泌体的纯度，降低其杂蛋白含量。
孵化液孵育细胞培养上清液浓缩液细胞培养离心去除杂质上清液分离提取液混合二次提取离心浓缩离心收集培养基无菌PBS 提取液有效地杂蛋白沉淀溶解

[发明专利]一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用-CN201911231372.4在审
发明人：白艳厅 -专利权人：珠海天使干细胞生物科技有限公司
申请日： 2019-12-05 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： A61K38/54 文献下载
摘要：本发明实施例公开了一种细胞外泌体在眼贴膜中的应用，具体涉及眼贴膜技术领域，包括细胞外泌体，所述细胞外泌体与修护溶酶制备外泌体修护溶酶，所述细胞外泌体与原生液精华制备外泌体原生液精华，将外泌体修护溶酶与外泌体原生液精华混合后，将眼贴膜浸泡于混合液中制备眼贴膜成品。本发明通过在传统的眼贴膜技术基础上增加细胞外泌体，外泌体对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用，可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞，也可以直接与受体细胞膜融合，此外，外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于皮肤表面
一种细胞外泌体眼贴膜中的应用

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