本发明公开了一种抗人Claudin18.2的单克隆抗体及其应用。该抗体具有如SEQ ID NO:2~4所示的轻链互补决定区,以及如SEQ ID NO:5~7所示的重链互补决定区。本发明提供的单克隆抗体能与人Claudin18.2蛋白特异结合,且与人Claudin18.1蛋白无交叉反应,效价高,亲和力好,能够用于特异检测人Claudin18.2蛋白,通过免疫组化方法检测待检测标本组织中的Claudin18.2的表达情况,检测结果可以作为临床医生的诊断依据之一,为临床肿瘤的诊断起预后判断的作用,帮助临床肿瘤的诊断、分类、预后判断以及疗效评估。