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[发明专利]一种用于细胞永生化的真核重组微环表达载体-CN201410525855.6在审
发明人：王月影;张君;杨国宇;李和平;钟凯;朱河水;郭豫杰;鲁维飞;韩立强;张超;焦显芹 -专利权人：河南农业大学
申请日： 2014-10-09 - 公布日： 2015-01-21 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种细胞永生化过程中所使用的真核重组微环表达载体Minicircle-MRPS18及其制备方法。该载体通过Tubofect试剂转染法转染Hela细胞可制备永生化细胞。本发明特异性的结合了Minicircle质粒载体与MRPS18基因的优点，所制备的真核重组微环表达载体，具有转基因持续表达时间长；不会引起真核细胞的应激非病毒式诱导系统，低免疫源性，安全稳定的优点；且该质粒表达载体表达GFP，便于跟踪反应；同时具备转染效率高、简单易用等优点，可以获得较好的永生化细胞制备效果。
一种用于细胞永生重组表达载体

[发明专利]一种永生化奶牛瘤胃上皮细胞系及其构建方法-CN201711144970.9在审
发明人：赵国琦;贡笑笑;詹康;姜茂成 -专利权人：扬州大学
申请日： 2017-11-17 - 公布日： 2018-04-06 - 主分类号： C12N15/86 文献下载
摘要：本发明提供一种永生化奶牛瘤胃上皮细胞系及其构建方法，所述构建方法包括如下步骤步骤a)将采集到的奶牛瘤胃上皮组织在培养基中剪碎清洗消化后进行原代培养，得到瘤胃上皮细胞；步骤b)将步骤a)所述的瘤胃上皮细胞与携带SV40T抗原基因的病毒液进行孵育得到感染的瘤胃上皮细胞；步骤c)将步骤b)感染的瘤胃上皮细胞进一步培养得到永生化的奶牛瘤胃上皮细胞系。本发明的永生化奶牛瘤胃上皮细胞系为奶牛瘤胃生理调控和营养吸收机制研究提供试验细胞模型，培养方法简单、生长速度快，本发明的构建方法可获得具有生理功能且能连续传代的BRECs。
一种永生奶牛瘤胃上皮细胞系及其构建方法

[发明专利]Ⅰ型干扰素受体基因敲除小鼠脾脏网状成纤维永生化细胞系的培养方法及应用-CN202110626105.8在审
发明人：李家斌;李嘉嘉;胡立芬;伍婷;刘艳艳;魏艳艳 -专利权人：安徽医科大学第一附属医院
申请日： 2021-06-29 - 公布日： 2021-09-07 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明属于生物医学技术领域，尤其是Ⅰ型干扰素受体基因敲除小鼠脾脏网状成纤维永生化细胞系的培养方法及应用，解决了现有技术中建立的小鼠FRCs原代永生化细胞系，病毒感染率虽高，但是病毒感染后上清液病毒含量却很低，且关键的细胞因子表达不高等问题，所述Ⅰ型干扰素受体基因敲除小鼠脾脏网状成纤维永生化细胞系的培养方法，包括使用Ⅰ型干扰素受体敲除小鼠脾脏，加消化液消化小鼠脾脏碎块；运用磁珠分选富集和流式细胞仪精确分选逐级分选方法；最后使用SV40大T抗原感染FRCs细胞，筛选、克隆并培养50代以上，得到了稳定的细胞系。本发明细胞系分离培养周期短，成本低，无磁珠富集过程。
干扰素受体基因小鼠脾脏网状纤维永生细胞系培养方法应用

[发明专利]一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定-CN202110855478.2在审
发明人：宋长绪;刘献辉;洪林君;张歆明;徐舸;熊谋康;张乐宜;刘艳玲;徐铮 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2021-07-28 - 公布日： 2021-11-02 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明公开一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定，采用永生化猪胚胎滋养层细胞作为一种新颖的细胞器来研究猪伪狂犬病毒和繁殖障碍疾病的联系，永生化的滋养层细胞系可高效/稳定的传代，且培养体系成熟。本发明的细胞系能支持PRV的复制，确定了PRV对永生化猪胚胎滋养层细胞能较好的感染，引起细胞病变，且与PRV感染传代细胞PK15的TCID50相差不到一个滴度，可以用于PRV的传代及受体方面，PRV引起繁殖障碍疾病等方面的机制等研究且本发明中传代滋养层细胞系的建立对于猪相关病毒的垂直传播研究及猪育种方面的相关研究有重要意义。
一种用于狂犬病毒复制滋养感染鉴定

[发明专利]一种用于制备多种病毒的羊源永生化细胞系-CN202211234941.2在审
发明人：关继羽;孙诗惠;赵魁;贺文琦;高丰;李姿 -专利权人：吉林大学
申请日： 2022-10-10 - 公布日： 2022-12-06 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于病毒培养、制备的羊源永生化细胞系。通过将hTERT基因导入羊胚胎鼻甲骨细胞(OFTu)，构建成为永生化OFTu细胞系。所述细胞系可用于扩增制备羊传染性脓疱病毒(ORFV)、绵羊痘病毒(SPV)、山羊痘病毒(GPV)、疙瘩皮肤病病毒(LSDV)中的至少一种。本发明提供的羊源永生化细胞系，具有较好的应用、转化前景：(1)细胞系可以持续传代，增殖性能稳定；(2)细胞系对羊传染性脓疱病病毒敏感，感染后收获病毒滴度较高，且病毒形态稳定。使用上述细胞系制备病毒可以降低生产成本、减少批间差异，为获得高质量的疫苗提供保障。
一种用于制备多种病毒永生细胞系

[发明专利]一种永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系及其构建方法和应用-CN202210225348.5在审
发明人：张才;何雷;孟素丹;王海蓉;邵琦;豆梦莹 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2022-03-09 - 公布日： 2022-10-11 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明属于引入外来遗传物质对细胞的修饰领域，具体涉及一种永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系及其构建方法和应用。本发明的永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系，其保藏号为CGMCC No.45029，于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所本发明的永生化荷斯坦公犊牛小肠上皮细胞系具有以下特点：其一是筛选获得的细胞活力强，传代80代后仍能保持高的细胞活性及生物学特性，其二是由于采用非病毒转染思路，对细胞的影响较病毒转染更小，应用范围大，结果的评价性更加准确
一种永生斯坦犊牛小肠上皮细胞系及其构建方法应用

[发明专利]猪FAPs永生化细胞的构建方法及用途-CN202211087073.X在审
发明人：单体中;刘事奇;有文静;顾馨;涂羽昂;汪以真 -专利权人：浙江大学
申请日： 2022-09-07 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪FAPs永生化细胞的构建方法及用途。构建方法，包括以下步骤：1）猪FAPs细胞的分离培养；2）转染过表达SV40T的慢病毒；3）抗生素筛选成功转入SV40T慢病毒的猪FAPs细胞。进一步，4）验证猪FAPs永生化细胞的永生化能力；5）建立猪FAPs细胞成纤维分化诱导方法；6）猪FAPs细胞3D培养模型建立。本发明：1）解决了当下猪FAPs细胞来源的局限，减少了动物牺牲数量，为FAPs细胞相关研究提供了可靠模型；2）可用于研究猪肌内脂肪的形成调控及其分子机制；3）还可用于研究FAPs细胞成脂/成纤维分化的命运决定机制；4）还可用于筛选靶向促进FAPs细胞增殖或成脂分化的营养素、生物活性因子等，为细胞培养肉的研发提供可靠的模型。
faps 永生细胞构建方法用途

[发明专利]新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用-CN201910037462.3有效
发明人：王光祥;张志东;王艳华;秦晓东;李彦敏;杨能能;贾宁;苏雅杰 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2019-01-15 - 公布日： 2021-10-15 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系及其建立方法和应用。所述的新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系，命名为新生牛睾丸支持细胞永生化细胞系hTERT‑NBSC，其保藏编号CCTCC NO：C2018201。该细胞系对接种ORFV较为敏感，可以高效增殖ORFV病毒，且可以保证病毒的均一、稳定。用该细胞系所增殖的ORFV病毒滴度与新生牛睾丸支持细胞相当，且细胞分种率高于NBSC，分种率可达1:3。同时利用该传代细胞系来制备疫苗，简化了生产工艺、缩短了生产周期，降低了生产成本，同时还保证了制备得到的羊传染性脓疱病疫苗的质量稳定。
新生睾丸支持细胞永生细胞系及其建立方法应用

[发明专利]缺氧诱导造血干细胞定向分化为永生化红系祖细胞的方法-CN201710892128.7有效
发明人：宋海鹏;叶海波;王庆东 -专利权人：长春力太生物技术有限公司
申请日： 2017-09-27 - 公布日： 2020-04-14 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明公开了一种缺氧条件下诱导造血干细胞定向分化为永生化红系祖细胞的方法，所述方法使用含有缺氧反应元件、CMV‑最小启动子和HPV16E6/E7基因的慢病毒表达载体转染CD34+造血干细胞并在缺氧条件下诱导所述造血干细胞定向分化为永生化红系祖细胞；本发明还公开了一种诱导所述永生化红系祖细胞分化为成熟红细胞的方法。使用本发明方法诱导出的红细胞具有与正常成熟红细胞接近的变形性和结合、释放氧气的能力，血红蛋白含氧量可达28±2mmHg，并且其在输注小鼠体内后的10分钟至24小时直径开始变小，在第24小时细胞就显示出了成熟红细胞的形态
缺氧诱导造血干细胞定向化为永生化红系祖细胞方法

[发明专利]一种永生化鸡胚胎肝细胞系及其制备方法和用途-CN201611140312.8在审
发明人：冯磊;恽君雯;吴培培;陈丽;侯继波 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2016-12-12 - 公布日： 2017-08-04 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种永生化鸡胚胎肝细胞系及其制备方法和用途。该永生化鸡胚胎肝细胞系CEL‑hMRP18S‑2于2016年12月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称为CGMCC），保藏编号为CGMCC NO.12333.保藏地址为北京市朝阳区北辰西路采用本发明所获得的永生化鸡胚胎肝细胞保留了原代鸡胚胎肝细胞的主要特征和主要功能。并且该细胞可以在体外无限制的扩增培养，该细胞系在体外传代100代仍具有较好的活力，保持分裂增殖，不发生衰老和凋亡。
一种永生胚胎肝细胞及其制备方法用途

[发明专利]一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法-CN201710084499.2有效
发明人：刘小青;陈光风;史秀娟;朱良 -专利权人：佰通生物技术(苏州)有限公司
申请日： 2017-02-16 - 公布日： 2020-01-07 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开一种条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法，包括步骤：A、利用DNA重组技术将细胞永生化基因插入第一克隆载体的克隆位点中并制成病毒颗粒；B、利用磁珠特异性选择人外周血中的一种免疫细胞，再利用步骤A中所制得的病毒颗粒感染，得永生化免疫细胞；C、利用DNA重组技术将自杀基因插入第二克隆载体中，然后转入所制得的永生化免疫细胞，即制得条件自杀性免疫细胞；D、利用DNA重组技术将单链抗体基因插入第三克隆载体的克隆位点中并制成病毒颗粒，再转染条件自杀性免疫细胞，得条件自杀性抗肿瘤靶向免疫细胞。解决了现有技术中肿瘤细胞靶向治疗副作用大、无法广泛临床应用、体内存活时间短、成本较高、可控性差的问题。
一种条件自杀性肿瘤靶向免疫细胞及其制备方法

[发明专利]分化无核细胞及其制备方法-CN201410168106.2在审
发明人：优素福·里菲利;布赖恩·柯蒂斯·特纳 -专利权人：泰加生物工艺学公司
申请日： 2009-07-21 - 公布日： 2014-07-23 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种分化无核细胞及其制备方法。所述方法包括：在诱导分化成红细胞的试剂存在下培养条件永生化造血干细胞，其中所述试剂为IL-3和EPO；其中所述试剂将条件永生化造血干细胞诱导分化为成熟红细胞。所述红细胞可以治疗选自由以下组成的群组的病症：表征为成熟红细胞的缺陷的病症、表征为失血的病症、贫血、高歇氏病、溶血、嗜中性白血球减少症、血小板减少症、粒细胞减少和血友病。
分化无核细胞及其制备方法

[发明专利]一种小鼠听觉神经元永生细胞系及其构建方法和应用-CN202211098985.7在审
发明人：刘闻闻;王嫚;王海波;王雪 -专利权人：山东省第二人民医院（山东省耳鼻喉医院、山东省耳鼻喉研究所）
申请日： 2022-09-09 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明涉及永生化细胞技术领域，尤其涉及一种小鼠听觉神经元永生细胞系及其构建方法和应用。本发明通过分离小鼠内耳螺旋神经节细胞后，利用SV40LT过表达慢病毒载体（EF1α‑SV40‑IRES‑puromycin载体元件）转染螺旋神经节细胞，并筛选转染成功的细胞，获得与原代小鼠内耳螺旋神经节细胞性状无明显差别的小鼠听觉神经元永生细胞系SIO‑SGN1，该永生细胞系可以稳定传代，实现内耳螺旋神经节细胞的离体培养和传代，为听觉研究提供便利条件。且该永生细胞系体外培养条件简单，传代速度快，是可以稳定用于听觉研究的细胞工具。
一种小鼠听觉神经元永生细胞系及其构建方法应用

[发明专利]一种绵羊羊睾丸细胞永生化细胞系的构建方法及其应用-CN201811481106.2在审
发明人：王桂军;刘光清;周晓雅;周祺;邢雪;许泽军;顾香雪;黄荣 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2018-12-05 - 公布日： 2019-04-19 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开了1.一种绵羊羊睾丸细胞永生化细胞系的构建方法，大致步骤如下：1)重组质粒构建；2)慢病毒样颗粒的制备；3)hTERT基因的细胞系构建和筛选；4)hTERT基因表达及其mRNA转录水平检测；5本发明构建方法有利于改善目前细胞系匮乏的研究现状，有利于资源的推广使用。绵羊羊睾丸永生化细胞系的建立减少了实验动物的使用量，提供了一种更为稳定的实验研究对象。
羊睾丸构建绵羊细胞永生化蛋白表达检测实验研究对象重组质粒构建细胞系构建实验动物慢病毒永生化制备筛选检测应用研究

[发明专利]用于获得永生化抗体分泌细胞的方法-CN200680052807.3无效
发明人：阿达·富纳罗;詹尼·加罗塔;玛丽安娜·墨菲 -专利权人：里博瓦克斯生物工艺有限公司
申请日： 2006-12-15 - 公布日： 2009-02-25 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明提供用于永生化可分泌一种或多种特定同种型抗体的细胞的新型方法。利用本发明方法获得的多克隆、寡克隆和单克隆细胞种群可在细胞培养条件下，基于它们分泌的抗体的功能和/或结合活性(如针对医学感兴趣的人类或病毒起源的抗原)进行筛选。利用这些方法，已通过EB病毒将可分泌结合人类巨细胞病毒、单纯疱疹病毒或HSP60蛋白的抗体的人类B细胞有效地永生化。
用于获得永生抗体分泌细胞方法

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