本发明公开了糖基转移酶OsUGT91C1突变体及其应用,SEQ ID No.1所示氨基酸序列是在糖基转移酶OsUGT91C1氨基酸序列的基础上将第208位氨基酸由Phe突变为Met;SEQ ID No.2所示氨基酸序列是在糖基转移酶OsUGT91C1氨基酸序列的基础上将第208位氨基酸由Phe突变为Met,且第379位氨基酸由Phe突变为Ala,其中上述两个突变体的第1‑14位氨基酸具有冗余性,可以完全去除或改变而不影响正常酶活性本发明的突变体,提高了催化相同正常反应的能力,进一步去除了OsUGT91C1原始酶所存在的副反应劣势,可高效催化生成包括Reb E的一系列甜菊糖苷产物。
TK1抗体包含重链可变区,重链可变区包含SEQ ID NO:1氨基酸序列的重链CDR1、SEQ ID NO:2氨基酸序列的重链CDR2以及SEQ ID NO:3氨基酸序列的重链CDR3;以及轻链可变区,轻链可变区包含SEQ ID NO:4氨基酸序列的轻链CDR1、SEQ ID NO:5氨基酸序列的轻链CDR2以及SEQ ID NO:6氨基酸序列的轻链CDR3。本发明制备了肝细胞肿瘤特异性抗体,其特异性结合肝肿瘤细胞且不阻断正常细胞的正常生存活力,亲和力强且表达稳定,能有意义地降低人肝肿瘤细胞增殖的速率,增加细胞凋亡频率。
具体地,本发明提供了2‑O‑硫酸化酶突变体,其在以下的任何一种氨基酸序列中具有由碱性氨基酸残基对位置321处的亮氨酸残基的取代:(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列;(b)氨基酸序列,其在SEQ IDNO:2的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加;或(c)氨基酸序列,其与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有90%或更多的同一性;或(d)氨基酸序列,其由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成;(e)氨基酸序列,其在由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加;或(f)氨基酸序列,其与由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列具有90%或更多的同一性;并且具有2‑O‑硫酸转移活性。
本发明涉及用于通过对映体选择性酶促还原将酮基化合物转化成相应的手性羟基化合物的方法,其中所述酮基化合物在存在辅因子的情况下用氧化还原酶还原,其特征在于使用具有氨基酸序列的氧化还原酶,在所述氨基酸序列中(a)至少70%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8之一的氨基酸,或(b)至少55%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:2的氨基酸,或(c)至少65%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:3的氨基酸,或(d)至少75%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:4的氨基酸,或(e)至少65%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:5的氨基酸,或(f)至少50%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:7的氨基酸,或(g)至少72%的氨基酸相同于氨基酸序列SEQ ID NO:129的氨基酸。