本发明提供了表现出高活性的2‑OST突变体。具体地，本发明提供了2‑O‑硫酸化酶突变体，其在以下的任何一种氨基酸序列中具有由碱性氨基酸残基对位置321处的亮氨酸残基的取代：(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列；(b)氨基酸序列，其在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加；或(c)氨基酸序列，其与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有90％或更多的同一性；或(d)氨基酸序列，其由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成；(e)氨基酸序列，其在由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列中包含一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加；或(f)氨基酸序列，其与由SEQ ID NO:2的氨基酸序列中位置69至356处的氨基酸残基组成的氨基酸序列具有90％或更多的同一性；并且具有2‑O‑硫酸转移活性。
本发明提供了生产具有经异构化的己糖醛酸残基的肝素前体(heparosan)化合物的方法以及以改善的C5‑差向异构化效率生产硫酸乙酰肝素的方法。具体地，本发明提供了生产具有经异构化的己糖醛酸残基的肝素前体化合物的方法，所述方法包括在存在选自由以下(A)至(F)组成的组的蛋白质的情况下，从肝素前体化合物生产所述具有经异构化的己糖醛酸残基的肝素前体化合物：(A)蛋白质，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列；(B)蛋白质，其包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有90％或更高同源性的氨基酸序列，并具有D‑葡糖醛酸基C5‑差向异构酶活性；(C)蛋白质，其包含在SEQ ID NO:2的氨基酸序列中缺失、取代、添加或插入一个或几个氨基酸残基而成的氨基酸序列，并具有D‑葡糖醛酸基C5‑差向异构酶活性；(D)蛋白质，其包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列；(E)蛋白质，其包含与SEQ ID NO:5的氨基酸序列具有90％或更高同源性的氨基酸序列，并具有D‑葡糖醛酸基C5‑差向异构酶活性；和(F)蛋白质，其包含在SEQ ID NO:5的氨基酸序列中缺失、取代、添加或插入一个或几个氨基酸残基而成的氨基酸序列，并具有D‑葡糖醛酸基C5‑差向异构酶活性。
