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[发明专利]真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白-CN201810554975.7有效
发明人：任哲;刘俊伟;王紫鋆;陈静怡;王一飞 -专利权人：暨南大学
申请日： 2018-05-31 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种真核表达载体、真核表达系统、二者的制备方法和应用及GDF11蛋白，涉及分子生物学技术领域，本发明提供的真核表达载体，能够高表达GDF11基因。本发明提供的上述真核表达载体的制备方法，包括将GDF11基因片段插入重组质粒，操作简单，制备得到的真核表达载体具有高表达GDF11基因的效果。本发明提供的真核表达系统，宿主细胞为CHO，能够稳定高效地表达重组蛋白GDF11。本发明提供的上述真核表达系统的制备方法，包括将真核表达载体转染到CHO细胞中，培养并筛选，通过DHFR二氢叶酸还原酶系统进行转染子筛选，能够在保证细胞活率的情况下，通过反馈调节，使GDF11基因扩增，提高蛋白的表达量
表达载体系统二者制备方法应用 gdf11 蛋白

[发明专利]一种免筛选原/真核双表达载体及其构建与应用-CN201710037821.6在审
发明人：马跃 -专利权人：西南大学
申请日： 2017-01-19 - 公布日： 2018-07-27 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种原/真核双表达载体及其构建方法、应用所述原/真核双表达载体进行免筛选PCR重组克隆目的基因的方法以及获得的包含目的基因的重组载体。本发明提供的原/真核双表达载体具备兼容的原核表达调控元件和真核表达调控元件，因此克隆入本发明载体的目的基因既能进行原核表达又能进行真核表达。本发明载体在Kozak序列与真核加尾信号序列之间含有一个高效自杀基因表达盒，因此采用本发明提供的PCR重组克隆技术克隆目的基因时，目的基因将插入本发明提供的原/真核双表达载体的Kozak序列与真核加尾信号序列之间并替换原有的高效自杀基因表达盒因此，应用本发明载体仅需一对PCR引物和两次PCR反应即可获得目的基因的原/真核双表达重组载体，无需使用内切酶、连接酶和其它DNA修饰酶，极大地节约时间成本和经济成本。
真核目的基因表达载体加尾信号序列原核表达重组载体自杀基因表达盒构建克隆真核表达调控元件筛选应用生物技术领域重组克隆技术重组载体克隆调控元件经济成本时间成本真核表达重组克隆自动筛选连接酶内切酶原有的替换兼容节约

[发明专利]利用TAT核心肽段促进外源蛋白可溶性表达的方法及其专用表达载体-CN201010119397.8有效
发明人：张成岗;吴永红;高艳 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
申请日： 2010-03-08 - 公布日： 2011-08-10 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用TAT核心肽段促进原核表达体系高效、可溶性表达外源蛋白的方法及其专用表达载体。该专用表达载体是含有一个或多个TAT核心多肽编码区的原核表达载体。该方法包括以下步骤：1)将外源基因插入该专用表达载体中，得到含有TAT核心多肽编码区和外源基因的原核表达载体；2)将原核表达载体向原核表达体系转化；3)原核表达载体的诱导表达；4)外源蛋白的制备。经检测，表达产物主要以可溶性的形式存在宿主菌裂解上清中，且占裂解上清总蛋白的25-30％，可以获得高产量的外源蛋白，可大量制备具有生物活性的外源蛋白。
利用 tat 核心促进蛋白可溶性表达方法及其专用载体

[发明专利]植物膜结合转录因子原核表达纯化的方法-CN202011279881.7在审
发明人：李晓娟;张原;鲁雨晴;边佳辉;姚晓敏;张耿;苏晓;刘佩佩 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2020-11-16 - 公布日： 2021-02-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了植物膜结合转录因子原核表达纯化的方法，包括如下步骤，步骤1：设计引物构建原核表达载体；步骤2：原核系统中蛋白的表达；步骤3：蛋白纯化。本发明在传统原核表达纯化的基础上，根据膜结合蛋白的蛋白结构与性质，优化了其纯化方法，并筛选了相应的诱导表达条件与纯化缓冲液配置方法，实现了对膜结合蛋白的原核高浓度纯化表达。
植物结合转录因子表达纯化方法

[发明专利]一种真核表达穿梭载体及其构建方法与应用-CN200810119704.5无效
发明人：刘金华;刘芹防;马广鹏;蒲娟;王帅 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2008-09-05 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种真核表达穿梭载体及其构建方法与应用。所述的真核表达穿梭载体，是一种环状载体，包含原核复制起点、两个真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒；所述外源基因表达盒自上游至下游依次由两个转录方向相同的启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号组成；用本发明的真核表达穿梭载体构建表达外源基因的重组载体的过程简便、快速、经济、高效，并且该载体含有两个真核复制起点，可以在表达T抗原的细胞中大量增值，从而提高蛋白表达的水平。本发明的真核表达穿梭载体具有很好的应用前景。
一种表达穿梭载体及其构建方法应用

[发明专利]一种原核表达载体及其构建方法和应用-CN202010102716.8在审
发明人：郭抗抗;赵娣;张亮;张彦明;刘勇 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2020-02-19 - 公布日： 2020-05-19 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种原核表达载体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明公开的一种原核表达载体，以pET‑32a为原始载体，在其基础上进行改造；双酶切pET‑32a原核表达载体，并合成两条含rbs序列及分别含有BamHⅠ、EcoRⅠ的酶切位点的单链，退火形成带缺口的双链，进而连入双酶切的pET‑32a原核表达载体，形成仅含单一his标签的原核表达载体pET‑32a‑gai。PCR扩增C蛋白的基因序列，将其连入pET‑32a‑gai原核表达载体形成pET‑32a‑gai‑C原核表达载体。本发明的原核表达载体将在外源小分子蛋白(特别是猪瘟病毒石门株衣壳蛋白C)表达的生产中发挥重要作用。
一种表达载体及其构建方法应用

[发明专利]海葵荧光蛋白新基因及其克隆、表达与应用-CN02134652.6无效
发明人：徐安龙;涂洪斌;熊茜 -专利权人：中山大学
申请日： 2002-09-03 - 公布日： 2003-12-31 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种海葵荧光蛋白新基因hmGFP，该新基因长度为904bp，编码228个氨基酸的成熟肽，所表达的蛋白质等电点为7.89，分子量为25,903道尔顿；本发明还公开了该新基因的克隆、表达，设计了两对引物，分别构建原核融合表达载体pTRX－hmGFP、原核非融合表达载体pET21b－hmGFP、真核表达载体pCDNA3－hmGFP；表达的重组海葵荧光蛋白的荧光散射波长为～502nm，最大激发波长～490nm本发明将hmGFP分别克隆于原核表达载体pET21b和真核表达载体pCDNA3实现了原核非融合表达和真核哺乳细胞表达，可用于欲示踪标记基因编码蛋白的胞内定位和功能研究。
海葵荧光蛋白基因及其克隆表达应用

[发明专利]表达PEDV的S+N双基因的真核表达载体-CN201710581841.X在审
发明人：王隆柏;陈秋勇;吴学敏;王晨燕;周伦江;车勇良;刘玉涛 -专利权人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2017-07-17 - 公布日： 2017-10-24 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种表达PEDV的S+N双基因的真核表达载体。所述真核表达载体，包含如SEQ.ID.NO1所示的核苷酸序列，通过PEDV的S和N基因片段，利用Blunt‑M2表达载体，通过无缝克隆技术，构建出表达PEDV的S+N双基因的真核表达载体。本发明是直接将纯化PEDV的S基因片段连接到Blunt‑M2哺乳动物真核表达载体中，不需要连接至单克隆载体PMD19‑T中，然后S+Blunt‑M2质粒通过无缝克隆技术，拼接N基因片段，从而获得S+N双基因融合表达载体因此，该真核表达载体的制备比较其他真核表达技术，具有操作步骤简单、反应时间短等特点，适合双基因融合蛋白表达。
表达 pedv 基因载体

[发明专利]人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3真核表达蛋白质单体制备方法-CN201910091727.8在审
发明人：刘红亮;吴勇延;高伟;王斌全;张宇良;牛敏;薛绪亭;郑希望 -专利权人：山西医科大学第一医院;高伟;吴勇延
申请日： 2019-01-30 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3真核表达蛋白质单体的制备方法，其方法是将人喉鳞状细胞癌相关基因SKA3插入PGEX‑4T‑1载体，获得PGEX‑4T‑1‑SKA3原核表达载体；再通过PCR获得融合片段GST‑SKA3并插入pCMV‑HA载体，获得带HA及GST标签的SKA3真核表达载体pCMV‑HA‑GST‑SKA3；培养转染了该真核表达载体的喉鳞状癌细胞Hep‑2，然后纯化获得重组GST融合蛋白。具体包括如下步骤：(1)原核表达载体PGEX‑4T‑1‑SKA3的构建与验证；(2)真核表达载体pCMV‑HA‑GST‑SKA3的构建与验证；(3)喉鳞状细胞癌Hep‑2细胞中真核表达及纯化。本发明选择GST标签可提高蛋白表达的可溶性和表达量；利用真核表达载体pCMV‑HA表达蛋白，表达时形成稳定的二硫键，对表达的蛋白进行正确折叠，并进行复杂糖基化修饰，蛋白活性接近于天然蛋白，不需去除内毒素
鳞状细胞癌真核表达载体pCMV 相关基因真核表达原核表达载体蛋白质单体构建制备验证内毒素真核表达载体鳞状癌细胞糖基化修饰表达蛋白蛋白表达蛋白活性天然蛋白表达量二硫键折叠转染去除蛋白细胞融合

[发明专利]骨形态发生蛋白BMP-2重组蛋白、编码基因及其原核表达方法-CN202310044443.X在审
发明人：易红飞;胡慧芳 -专利权人：翌圣生物科技（上海）股份有限公司
申请日： 2023-01-30 - 公布日： 2023-05-23 - 主分类号： C07K14/51 文献下载
摘要：还公开了其编码基因、表达质粒、原核表达载体以及原核表达方法。本发明采用原核表达系统，创造性地引入增溶标签，使包涵体表达转为可溶性表达，BMP‑2在原核系统中为包涵体表达，通过添加增溶标签，使蛋白转为可溶性表达，减小了蛋白分离纯化的难度，缩短了纯化周期，提高了纯化效率
形态发生蛋白 bmp 重组编码基因及其表达方法

[发明专利]蛋白真核表达启动子与蛋白表达载体及其构建方法与应用-CN201910749622.7有效
发明人：马婧姣;谢立香;严亚贤;孙建和 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2019-08-14 - 公布日： 2021-11-12 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明涉及蛋白真核表达启动子与蛋白表达载体及其构建方法与应用。蛋白表达载体是一种环状载体，包含原核复制起点、一个真核复制起点、筛选标记基因和外源基因表达盒，所述外源基因表达盒自上游至下游依次由蛋白真核表达启动子、连接片段和多聚腺苷酸加尾信号组成，所述连接片段含有AfeI与现有技术相比，本发明的蛋白表达载体利用蛋白真核表达启动子驱动外源基因表达，该载体含有的启动子元件在禽源与人源细胞中均具有高效的蛋白表达效率，而且本载体的构建过程简便、快速、经济、高效。本发明的蛋白表达载体具有很好的应用前景。
蛋白表达启动子载体及其构建方法应用

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒p72蛋白稳定表达细胞系及其构建方法-CN202210699860.3在审
发明人：冯夏宁;李作生;陈瑞爱;刘郁夫;容芳;郝文茜;王圳 -专利权人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心
申请日： 2022-06-20 - 公布日： 2022-09-13 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种非洲猪瘟病毒p72蛋白稳定表达细胞系及其构建方法，在将p72蛋白完成序列改造得到重组蛋白后，分别将其克隆至原核表达载体、真核表达载体，分别进行原核表达、真核表达和；其中，在原核表达的过程中，能得到稳定表达p72重组蛋白的大肠杆菌以及能得到纯化后的p72重组蛋白；经过真核表达后，能得到稳定表达p72重组蛋白的CHO细胞株。利用本发明的构建方法能在2个月内筛选获得表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的CHO细胞株，并在没有嘌呤霉素筛选压力下，细胞系传至20代，仍可检测到外源重组蛋白，成功率为90％，具有试验周期短、成功率高和表达成本低的优点
一种非洲猪瘟病毒 p72 蛋白稳定表达细胞系及其构建方法

[发明专利]重组赤羽病毒核衣壳蛋白、其制备方法及应用-CN200510116853.2无效
发明人：吴东来;李少英;孟庆文;尹训南 -专利权人：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
申请日： 2005-10-31 - 公布日： 2006-05-10 - 主分类号： C07K14/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种新的重组赤羽病毒核衣壳蛋白、编码该重组蛋白基因以及该重组蛋白的制备方法。本发明重组蛋白具有SEQ ID No：1所示的氨基酸序列，编码该重组赤羽病毒核衣壳蛋白基因具有SEQ ID No：2所示的核苷酸序列。本发明重组蛋白的制备方法包括以下步骤：构建重组赤羽病毒核衣壳蛋白基因原核表达载体；用重组赤羽病毒核衣壳蛋白基因原核表达载体转化大肠杆菌；用IPTG诱导重组核衣壳蛋白表达，回收并纯化所表达的重组核衣壳蛋白本发明重组赤羽病毒核衣壳蛋白能够在大肠杆菌中高效表达，所表达的重组蛋白具有高免疫学活性和高敏感性，利用该重组赤羽病毒核衣壳蛋白制备成的抗血清，采用间接荧光抗体法可以快速、准确的检测出组织中的赤羽病毒抗原
重组病毒核衣壳蛋白制备方法应用

[发明专利]一种热词确定方法、装置及设备-CN201710931100.X有效
发明人：蔡巍;崔朝辉;赵立军;张霞 -专利权人：东软集团股份有限公司
申请日： 2017-10-09 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： G06F16/33 文献下载
摘要：本申请实施例公开了一种热词确定方法，通过对文本语料的共词网络进行K‑核解析，得到共词网络的各个节点的核数，由于核数反映节点表达该文本语料中心思想的能力，核数越高的节点表达中心思想的能力越高，核数越低的节点表达中心思想的能力越低，所以将核数大于或等于预设核数的节点确定为热词，这些热词的方式，本申请通过核数确定的热词更能表达文本语料的中心思想，因而更为准确。
一种确定方法装置设备

[发明专利]基于激活表达可替换性的遥感图像建筑物识别方法-CN202010314628.4有效
发明人：陈力;李海峰;彭剑;朱佳玮;黄浩哲;崔振琦 -专利权人：中南大学
申请日： 2020-04-21 - 公布日： 2021-07-06 - 主分类号： G06K9/00 文献下载
摘要：本发明公开了基于激活表达可替换性的遥感图像建筑物识别方法，包括以下步骤：获取遥感图像建筑物数据集；训练普通深度神经网络模型；计算识别所述模型中每个卷积核的独立最大响应图；计算每个卷积核的激活表达可替换性；根据每个卷积核的激活表达可替换性对模型卷积核进行修剪，保留小的激活表达可替换性；使用修剪后的深度神经网络模型进行遥感图像建筑物识别。本发明方法针对基于深度学习的建筑物识别模型提出激活的表达可替换性指标方法，它可以量化同层上每个卷积核在特征空间表达的可替换性，卷积核的激活的表达可替换性值越低，代表它在特征空间越不可替换，进而针对卷积核进行选择性修剪
基于激活表达替换遥感图像建筑物识别方法

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