一种茎环引物辅助的等温核酸扩增技术,其特征在于,按下列步骤进行:a、SPA的引物设计:首先针对模板设计两条普通引物,即正向引物FP和反向引物BP;b、设计好普通引物后,再在FP和BP的5’端添加茎环序列,形成一对茎环引物,即正向茎环引物SFP和反向茎环引物SBP;c、SPA引物混合液液配制:SPA的扩增引物由普通引物FP、BP和茎环引物SFP、SBP混合而成;d、SPA缓冲液配制2×SPAMix:称取氯化钾,硫酸铵,七水硫酸镁,甜菜碱,Tris‑HCl,dNTP,1.0mL100倍稀释的SYBR green Ⅰ,吐温‑20,充分溶解并定容,每管分装‑20°C保存;e、SPA反应液配制:SPA反应为10‑50µL
本发明涉及一种ABCG2基因多态性检测试剂盒,所述检测试剂盒包括:底物、检测液、酶系混合液、特异性引物、三磷酸腺苷双磷酸酶和检测板,检测板上设有若干检测样孔,检测液预先封存在检测样孔中,酶系混合液包括DNA聚合酶、ATP硫酸化酶及荧光素酶,特异性引物为待测单链的特异性退火引物,所述SNP位点的待测序列包含在如序列表SEQ ID NO:1所示的序列中,测序的退火引物序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明中的ABCG2基因多态性检测试剂盒可以适用于市面上所有已出现或在研究中的SNP位点及所有的特异性引物,可以根据需要随时调整试剂盒的检测内容及数量,可操作性强,有大规模的推广价值。
本发明提出了一种检测人细小病毒B19核酸的试剂盒和方法,其中试剂盒包括预混反应液、阳性对照和阴性对照,所述预混反应液包括核酸扩增反应液和酶混合液,所述核酸扩增反应液包括B19上游引物、下游引物和B19探针,其序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示;以及内标上游引物、下游引物和探针,其序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:本发明试剂盒为预混反应液,避免了反应液和酶混合时带来的误差,减少了操作难度,极大提高了检测灵敏度。
本发明公开了一种快速高效检测雪峰虫草不同菌株交配型的方法及引物组,包括步骤一、将待检测物与雪峰虫草MAT1‑1交配型引物组或雪峰虫草MAT1‑2交配型引物组混合,得到混合反应液;雪峰虫草MAT1‑1交配型引物组包括序列SEQ ID NO:1、序列SEQ ID NO:2、序列SEQ ID NO:3和序列SEQ ID NO:4;所述雪峰虫草MAT1‑2交配型引物组包括序列SEQ ID NO:5、序列SEQ ID NO:6、序列SEQ ID NO:7和序列SEQ ID NO:8;步骤二、将混合反应液加热进行环介导等温扩增;步骤三、根据混合反应液颜色得到检测结果。本发明的检测结果特性强,简单快速,不需要PCR热变形、温度循环、胶电泳和紫外显影等步骤,只需将试剂混合后置于恒温水浴锅中反应,通过混合液的颜色即可快速区分交配型,实现了区分雪峰虫草交配型的高效、快速检测