本发明公开了一种建鲤管家基因18sRNA基因部分序列克隆方法及其real time PCR方法,通过对建鲤血液基因组DNA提取,设计引物、PCR扩增,产物纯化,转入T载体,转化入感受态细胞,筛选蓝白斑,质粒测序,设计的引物序列正向序列如SEQIDNO.1所示,反向序列如SEQIDNO.2所示;克隆得到的建鲤18sRNA基因部分序列为SEQIDNO.3所示;然后设计实时定量PCR(real time PCR本发明可为18sRNA作为管家基因,在利用real time PCR对建鲤功能基因的研究中提供有用的方法。
本发明公开了一种建鲤反转录转座子及转基因载体的构建方法和用途,所述转座子包含SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;一种人工设计合成的核苷酸序列,如SEQ ID NO.2所示;一种基因载体,所述的基因载体包含所述的建鲤反转录转座子和所述的建鲤反转录转座子和基因载体在介导DNA导入细胞中的应用。本发明通过在建鲤肝细胞中进行转座活性验证,证实上述转座子具备转座活性,所述的基因转移系统能在建鲤肝细胞中进行高效转座,因而本发明为进一步验证转座子的转座效率以及采用该转座子在脊椎动物中进行相关研究及应用奠定了基础