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[发明专利]一种模拟骨髓间充质干细胞移植体外模型的构建方法-CN201210492449.5有效
发明人：姜晓丹;李鹏;法志强;张润;孙海涛;刘翼 -专利权人：姜晓丹;李鹏
申请日： 2012-11-27 - 公布日： 2013-03-27 - 主分类号： C12N5/0793 文献下载
摘要：本发明公开了一种模拟骨髓间充质干细胞移植体外模型的构建方法，含以下步骤：(1)选取离体乳鼠皮层神经元；(2)选取离体大鼠骨髓间充质干细胞；(3)将大鼠骨髓间充质干细胞经预处理后，接种于乳鼠皮层神经元中进行共培养；(4)将共培养后的大鼠骨髓间充质干细胞和乳鼠皮层神经元经光镜、荧光显微镜、原子力显微镜及扫描电镜，确立模拟骨髓间充质干细胞移植的体外模型以及在超微结构上确定皮层神经元与骨髓间充质干细胞之间生长趋势、相互作用及突触样结构的形成其为间充质干细胞移植提供了一个简化的体外模型，同时此模型中所形成的突触样结构为间充质干细胞损伤机制提供了结构整合机制的体外证据。
一种模拟骨髓间充质干细胞移植体外模型构建方法

[发明专利]利用Rspo1抑制骨髓间充质干细胞凋亡的方法-CN201811576967.9在审
发明人：解军;程肖霞;杨丽红;杨巧艳;张慧超;谭奎;张娟;刘丹;李仁科 -专利权人：山西医科大学
申请日： 2018-12-23 - 公布日： 2019-04-05 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用Rspo1抑制骨髓间充质干细胞凋亡的方法，是以携带Rspo1基因的腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，转染72h后获得稳定表达Rspo1的骨髓间充质干细胞株。经流式细胞仪、免疫荧光和qPCR检测，Rspo1转染进入骨髓间充质干细胞。对转染后骨髓间充质干细胞进行流式细胞和AO‑EB双染检测细胞凋亡情况，证明Rspo1通过抑制凋亡改善了骨髓间充质干细胞的生存状态，为骨髓间充质干细胞的体外快速生长提供了条件。
骨髓间充质干细胞转染骨髓间充质干细胞凋亡大鼠骨髓间充质干细胞流式细胞仪快速生长流式细胞免疫荧光生存状态稳定表达细胞凋亡腺病毒检测凋亡对转体外基因携带

[发明专利]自然铜浸出液制备促进骨髓间充质干细胞分化药物的应用-CN201910118984.6在审
发明人：李红玉;黄欣;周建 -专利权人：兰州大学
申请日： 2019-02-18 - 公布日： 2019-04-12 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及一种自然铜Thiobacillus ferrooxidans BY3浸出液在制备促进骨髓间充质干细胞成骨化分化药物中的应用，本发明以大鼠骨髓间充质干细胞作为作用对象，研究了自然铜Thiobacillus ferrooxidans BY3浸出液在促进骨髓间充质干细胞成骨性分化的过程中作用。结果表明自然铜Thiobacillus ferrooxidans BY3浸出液能够提高体外培养骨髓间充质干细胞的ALP活性，促进骨髓间充质干细胞的钙盐沉积，进而促进骨髓间充质干细胞的成骨化分化。
骨髓间充质干细胞浸出液自然铜分化骨化制备大鼠骨髓间充质干细胞体外培养作用对象成骨性沉积钙盐应用研究

[发明专利]一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法-CN202011555174.6在审
发明人：孙小林;顾翔;徐佩;李红校;朱业;左其生;李碧春 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2021-03-12 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法，包括以下步骤：（1）构建慢病毒干扰载体G9a‑shRNA，将G9a‑shRNA转染至大鼠骨髓间充质干细胞；（2）通过5‑氮杂胞苷诱导转染干扰载体后的骨髓间充质干细胞，在第21天的时候流式细胞检测肌钙蛋白阳性细胞的阳性率。通过本发明，在5‑氮杂胞苷诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞过程中，敲低H3K9me2甲基化酶G9a，观察其最终诱导效率，以期为骨髓间充质干细胞分化心肌细胞过程中寻找一种方便、快速的途径。采用FuGENE（Promega）脂质体介导G9a‑shRNA慢病毒重组质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞，以减低H3K9me2的表达的方法，从而增加诱导效率，验证结果合理准确，实验过程严密周谨。
一种提升大鼠骨髓间充质干细胞化为心肌细胞效率方法

[发明专利]一种诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成破骨样细胞的方法-CN201711029436.3在审
发明人：许健;杨亚洋;沈雯;任军;许斌;姚叶涛;沈灿 -专利权人：许健;杨亚洋;沈雯
申请日： 2017-10-20 - 公布日： 2019-04-30 - 主分类号： C12N5/078 文献下载
摘要：本发明涉及细胞生物学及生物医药技术领域，本发明公开了一种诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成破骨样细胞的方法，包括以下步骤：大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养；采用流式细胞术鉴定分离的大鼠骨髓间充质干细胞表面分子；采用硫代乙酰胺诱导大鼠骨髓间充质干细胞3至7天，即可得到破骨样细胞，经过抗酒石酸酸性磷酸酶染色，免疫印迹技术，免疫荧光技术鉴定后，证实其具有破骨细胞特性，可供科学研究，从而发现一种新型体外获得破骨细胞生成的体系此外，本发明所使用的硫代乙酰胺因其价格低廉，容易获取，使用方便，可作为制备骨与关节病变细胞模型和药物筛选模型的药物，弥补了对该病研究的一大缺陷，并具有广阔的市场应用前景。
大鼠骨髓间充质干细胞破骨诱导硫代乙酰胺细胞酸性磷酸酶染色细胞生物学免疫印迹技术免疫荧光技术破骨细胞生成生物医药技术药物筛选模型分化流式细胞术表面分子关节病变破骨细胞市场应用细胞模型酒石酸体外制备科学研究发现研究

[发明专利]一种放射性细胞损伤模型的构建方法-CN202010322000.9在审
发明人：赵路;田磊;贾骏麒;宗春琳;张哲儒;靳丹;郭凯;景莉 -专利权人：中国人民解放军空军军医大学
申请日： 2020-04-22 - 公布日： 2020-07-17 - 主分类号： C12N13/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种放射性细胞损伤模型的构建方法，其包括从幼年SD大鼠的股骨和胫骨的骨髓中提取骨髓间充质干细胞，培养传至第3代；对第3代骨髓间充质干细胞进行鉴定；利用钴60放射源的γ射线照射骨髓间充质干细胞，照射剂量梯度设置为2、4、6、8Gy，γ射线剂量率控制在2.538Gy/min，对升降源过程中的边界效应进行积分计算，使骨髓间充质干细胞实际所受的累积照射剂量达到设定剂量；根据骨髓间充质干细胞增殖能力、凋亡程度，结合活细胞筛选检测，选定特定γ射线照射剂量照射的骨髓间充质干细胞作为所述放射性细胞损伤模型。本发明为以后研究生物体电离辐射损伤效应、辐射防护以及相关疾病提供了一个具有较高可靠性和可重复性的细胞模型。
一种放射性细胞损伤模型构建方法

[发明专利]Rspo1诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的应用-CN201811519862.X在审
发明人：杨丽红;解军;杨巧艳;程肖霞;宋慧芳;何生;张娟;于保锋;刘丹 -专利权人：山西医科大学
申请日： 2018-12-12 - 公布日： 2019-04-02 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了Rspo1诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的应用。以腺病毒为载体，将Rspo1转染大鼠骨髓间充质干细胞，经5‑氮杂胞嘧啶核苷诱导分化，可以检测到心肌样细胞的心肌细胞特异性蛋白表达，且表达量显著增加，表明Rspo1促进了骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化，其心肌样细胞转化率高达53%。
心肌骨髓间充质干细胞细胞分化诱导大鼠骨髓间充质干细胞氮杂胞嘧啶特异性蛋白细胞转化率心肌细胞诱导分化表达量腺病毒核苷转染应用细胞检测

[发明专利]大鼠骨髓MSC体内移植定向分化为视网膜结构的方法-CN200310103391.1无效
发明人：裴雪涛;张杰;单清;钱焕文;马萍 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所
申请日： 2003-10-31 - 公布日： 2005-05-04 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：本发明为大鼠骨髓MSCs体内移植定向分化为视网膜结构的方法。本发明的目的是提供一种将骨髓间充质干细胞移植于视网膜下并在原位分化为视网膜结构的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：分离出的大鼠骨髓间充质干细胞在体内进行定向诱导分化的方案，其特征在于利用特定的细胞密度和注射方式使骨髓间充质干细胞在原位分化为视网膜结构(包括视网膜色素上皮细胞、视锥、视杆细胞、双极细胞及节细胞)。本发明提供了神经细胞缺失后的补充来源，为临床研制视网膜损伤修复供体奠定了基础。
大鼠骨髓 msc 体内移植定向化为视网膜结构方法

[发明专利]川芎嗪在制备用于防治糖皮质激素性骨质疏松症的药物中的应用-CN201610596386.6有效
发明人：罗卓荆;王龙;杨柳;张洪洋;林希圣 -专利权人：中国人民解放军第四军医大学
申请日： 2016-07-26 - 公布日： 2018-01-30 - 主分类号： A61K31/4965 文献下载
摘要：川芎嗪对骨髓间充质干细胞无毒性作用，不影响细胞增殖；对糖皮质激素造成的骨髓间充质干细胞的凋亡具有保护作用；能够调控糖皮质激素作用下骨髓间充质干细胞的自噬水平，增强自噬活性；对高浓度糖皮质激素造成的骨髓间充质干细胞成骨分化抑制具有保护作用在糖皮质激素性骨质疏松大鼠模型中，川芎嗪可以增强体内骨髓间充质干细胞自噬水平并减少凋亡，改善股骨远端松质骨骨微结构，提高股骨远端的骨形成率，表明川芎嗪能够通过抑制糖皮质激素对骨髓间充质干细胞造成的损伤而改善骨微结构
川芎防治糖皮质激素骨质疏松应用

[发明专利]促使骨髓间充质干细胞在大鼠脑内分化成神经元的新方法-CN201110310497.3无效
发明人：田杰 -专利权人：北京清美联创干细胞科技有限公司
申请日： 2011-10-14 - 公布日： 2013-04-17 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种使大鼠脑内移植的骨髓间充质干细胞定向分化成神经元的方法。具体步骤包括从骨髓分离间充质干细胞并进行扩增和纯化；并通过PCR克隆为人脑源性神经营养因子(hBNDF)蛋白编码的cDNA序列，构建携带hBNDF编码基因的表达载体，最终将表达hBNDF编码基因的间充质干细胞通过脑立体定向方法移植入大鼠脑内在hBNDF的诱导下，间充质干细胞定向分化成神经元的数量明显增多。本发明提供的方法可大大提高脑内移植的间充质干细胞向神经元分化的数量，为神经系统疾病的干细胞治疗开拓了新方法，具有广阔的临床应用前景。
促使骨髓间充质干细胞大鼠脑内分化成神经元新方法

[发明专利]检测大鼠骨髓间充质干细胞表面分子标记的试剂盒及方法-CN201010569218.0无效
发明人：杨仕明;秦贺;赵立东;翟所强;郭维维;孙建和;杨伟炎 -专利权人：中国人民解放军总医院
申请日： 2010-11-26 - 公布日： 2011-06-15 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供了一种用于检测大鼠骨髓间充质干细胞表面分子标记的试剂盒，以及检测大鼠骨髓间充质干细胞表面分子标记的方法，所述试剂盒包括表面分子β-actin、SH2、CD44、CD34和CD31的上下游引物溶液，并且可进一步包括总RNA提取液、反转录公共混合液、随机引物、dNTP混合液、聚合酶链式反应(PCR)反应公共液，本发明的试剂盒可用于快速准确地检测大鼠骨髓间充质干细胞的表面分子特征，用于鉴定该细胞，以便利用此类细胞进行下一步实验
检测大鼠骨髓间充质干细胞表面分子标记试剂盒方法

[发明专利]一种提取骨髓间充质干细胞的方法及应用-CN201810283166.7在审
发明人：蓝蔚仁;孙超;左睿;李海音;蒋长青;潘赛;李长青 -专利权人：中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院
申请日： 2018-04-02 - 公布日： 2018-09-14 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明涉及一种提取骨髓间充质干细胞的方法，包括：前处理，得到股骨和胫骨；冲洗股骨和胫骨，提取骨髓腔内容物，得到包含团块状骨髓腔内容物的冲洗液，收集冲洗液中的干细胞；吹打剩余的骨髓腔团块内容物，得到单细胞悬液，收集单细胞悬液中的干细胞；将得到的干细胞细胞接板和细胞培养。该方法可用于提取大鼠骨髓间充质干细胞。获得的骨髓间充质干细胞可应用于细胞生物学研究。具有操作简单、成本小、污染几率小、干细胞损耗小、细胞提取量大、纯度高、重复性好等优点。
干细胞骨髓间充质干细胞骨髓腔内容物单细胞悬液冲洗液股骨胫骨细胞培养大鼠骨髓间充质干细胞细胞生物学研究生物学研究污染几率细胞提取重要意义前处理团块状吹打接板可用团块冲洗应用细胞

[发明专利]一种用于抗衰老的细胞制剂的制备方法-CN201610569971.7在审
发明人：张正亮 -专利权人：安徽惠恩生物科技股份有限公司
申请日： 2016-07-19 - 公布日： 2016-12-07 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于抗衰老细胞制剂的制备方法，按照如下步骤进行：将抽取的骨髓加入至培养液中，离心后弃上清液并接种于培养皿中培养，原代培养24‑48h后第一次换液，之后每3d换液一次，第三次换液12‑18h后以1:2比例传代培养，之后取培养的第三代骨髓间充质干细胞加入到生理盐水中重悬，制得骨髓间充质干细胞制剂。本发明方法通过将骨髓间充质干细胞分离培养，并将体外培养的骨髓间充质干细胞加入到生理盐水中重悬，制得骨髓间充质干细胞制剂，结果发现该细胞制剂能够改善衰老大鼠各组织细胞形态的损伤，具有一定的逆转衰老损伤的作用，为研究骨髓间充质干细胞抗衰老机制，以及人体抗衰老研究提供线索。
一种用于衰老细胞制剂制备方法

[发明专利]可回复性永生化大鼠骨髓间充质干细胞及其制备方法和应用-CN201110183749.0无效
发明人：李廷玉;毕杨;龚敏;陈洁;江伟;张赟;魏小平 -专利权人：重庆医科大学附属儿童医院
申请日： 2011-07-01 - 公布日： 2011-11-23 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种可回复性永生化大鼠骨髓间充质干细胞，其携带有SV40T基因及潮霉素抗性基因，SV40T基因的两端还有同向的Loxp位点；其制备方法是将SSR69质粒与pAmhpo质粒共转染HEK293细胞，获得重组逆转录病毒，再将该重组逆转录病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞，用潮霉素进行筛选，即得具有潮霉素抗性的可回复性永生化大鼠骨髓间充质干细胞；该细胞具有与原代大鼠MSCs同样的生物学特性，还具有体外增殖能力强，生物学性状稳定，可回复到原有状态，生物安全性好等特点，可以作为成神经诱导分化的种子细胞以及治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的种子细胞应用。
回复永生大鼠骨髓间充质干细胞及其制备方法应用

[发明专利]一种大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养方法-CN202211683600.3在审
发明人：朱峰;王玉松;马琪敏;刘晓彬;沈拓;侯文佳;王丹;房贺;范晓明;孙瑜;郑兴锋 -专利权人：中国人民解放军海军军医大学第一附属医院
申请日： 2022-12-27 - 公布日： 2023-04-21 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，公开了一种大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养方法，包括：获取大鼠的双侧股骨和胫骨，剔除表面的肌肉，并利用清洗液反复冲洗干净；在无菌条件下，剪除所述双侧股骨和胫骨的两头，并利用清洗液多次冲洗股骨胫骨两端断口；将骨髓冲入培养液中，将细胞悬液直接接种于培养瓶中进行培养，待细胞80％汇合后胰蛋白酶消化传代培养；取健康生长第2代大鼠MSC制成细胞悬液移至离心管中，离心；弃上清液，用清洗液调整细胞浓度；加入兔抗鼠CD45、CD44、CD90单克隆抗体，室温孵育，得到大鼠骨髓间充质干细胞。本发明提供了一种大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定方法，操作简单，细胞产量和成活率高。
一种大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法

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