本发明公开了一种提高大球盖菇木质纤维素酶活性的方法。本发明首次实现大球盖菇中碳代谢转录因子(CreA)基因沉默,获得了能够使大球盖菇基因沉默的体系,沉默体系中具有如SEQ ID NO.3所示的干扰片段基因序列;本发明通过在特异性引物中引入KpnⅠ酶切位点和SpeⅠ酶切位点,构建的CreA沉默载体在转至大球盖菇体内后可以显著降低大球盖菇CreA基因的表达;同时碳代谢转录因子(CreA)基因的沉默也可以解除碳代谢阻遏效应,使大球盖菇纤维素酶和半纤维素酶活性显著提高因此,本发明对大球盖菇栽培生产过程中提高栽培基质的利用效率和缩短栽培周期有重要的意义。