本发明公开了一种编码贝莱斯芽孢杆菌的壳聚糖酶基因、壳聚糖酶及其制备方法和应用，编码贝莱斯芽孢杆菌的壳聚糖酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的编码贝莱斯芽孢杆菌的壳聚糖酶基因，运用贝莱斯芽孢杆菌的壳聚糖酶基因制备壳聚糖酶，壳聚糖酶表达后为胞外酶，因此，诱导表达后不需要细胞破碎，直接收集上清液即为壳聚糖酶。
本发明公开了壳聚糖酶CHI3、其编码基因及其制备方法，所述壳聚糖酶CHI3具有如Seq ID No:1所示的氨基酸序列，属于壳聚糖酶GH46家族。上述壳聚糖酶的编码基因具有如Seq ID No:2所示的核苷酸序列。生产上述壳聚糖酶的方法包括以下步骤：在适合与所述壳聚糖酶生产的条件下，对上述能表达壳聚糖酶的培养物进行发酵，并对发酵产物进行分离和纯化，得到壳聚糖酶。本发明提供的壳聚糖酶的活性高、稳定性高，可通过工程菌发酵进行该酶的大批量生产，以便于将该壳聚糖酶应用于工业化寡聚糖生产中，将普遍存在的低成本的壳聚糖降解为更具应用价值的寡聚糖。
本发明公开了新壳聚糖酶CHI2、其编码基因及其应用，所述新壳聚糖酶具有如Seq ID No:1或具有与Seq ID No:1所示的氨基酸序列至少95％的序列同一性且具有基本相同酶活的氨基酸序列所示的氨基酸序列，属于壳聚糖酶GH8家族。所述新型壳聚糖酶来源于海鲜市场污泥宏基因组。上述新型壳聚糖酶的编码基因，该编码基因具有如Seq ID No:2所示的核苷酸序列。生产上述新型壳聚糖酶的方法包括以下步骤：在适合所述新型壳聚糖酶生产的条件下，对上述能表达新型壳聚糖酶的培养物进行发酵，并对发酵产物进行分离和纯化，得到壳聚糖酶。本发明提供的新型壳聚糖酶的活性高、稳定性高，可通过工程菌发酵进行该酶的大批量生产，以便于将该壳聚糖酶应用于工业化寡聚糖生产中。
本发明公开了新壳聚糖酶CHI1、其编码基因及其应用，所述新壳聚糖酶具有如Seq ID No:1所示的氨基酸序列或至少95％的序列同一性且具有基本相同酶活的氨基酸序列。所述新壳聚糖酶来源于小黄鱼消化道内容物宏基因组。上述新壳聚糖酶的编码基因，该编码基因具有如Seq ID No:2的核苷酸序列。生产上述新壳聚糖酶CHI1的方法包括以下步骤：在适合与所述新壳聚糖酶生产的条件下，对上述能表达新壳聚糖酶的培养物进行发酵，并对发酵产物进行分离和纯化，得到壳聚糖酶。本发明提供的新壳聚糖酶的活性高、稳定性高，可通过工程菌发酵进行该酶的大批量生产，以便于将该壳聚糖酶应用于工业化寡聚糖生产中。
本发明公开了一种制备壳寡糖的方法、壳聚糖酶及其基因、酶制剂与应用，属于水解酶技术领域。本发明的制备壳寡糖的方法为：采用SEQ ID NO.1所示的壳聚糖酶酶解壳聚糖或胶质甲壳素生产壳寡糖，酶解条件为：pH 4.0～8.0，温度50～80℃。本发明的壳聚糖酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码该壳聚糖酶的基因如SEQ ID NO.2所示。本发明的酶制剂，含有该壳聚糖酶。所述壳聚糖酶、酶制剂在降解壳聚糖或胶质甲壳素中的应用，在制备壳寡糖中的应用。本发明采用特定的壳聚糖酶制备壳寡糖，催化活性高，可在高温条件下进行。本发明的壳聚糖酶可以在高温条件下酶解壳聚糖，高效酶解壳聚糖制备壳寡糖。
本发明公开了壳聚糖酶OUC‑CsnPa，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码壳聚糖酶OUC‑CsnPa的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述壳聚糖酶OUC‑CsnPa在降解壳聚糖/制备壳寡糖中的应用。一种包含壳聚糖酶OUC‑CsnPa的酶制剂。本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnPa，作用高乙酰度壳聚糖底物时，可产生更多的带乙酰基壳寡糖，对乙酰基的A单元也展现了相比于一般壳聚糖酶更优的偏好性。本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnPa具有优良的酶学性质和特异性，在酶法制备乙酰壳寡糖中具有重要的工业应用价值以及经济价值。
本发明公开了壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49P及其应用，属于壳聚糖酶技术领域。所述壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49P的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。所述壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49P在制备壳寡糖中的应用，所述壳寡糖的聚合度为2～5。本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49P具有产物特异性，降解壳聚糖可得到高聚合度的壳寡糖。本发明拓宽了GH 46家族的壳聚糖酶酶解壳聚糖的产物谱，可用于制备高聚合度的壳寡糖。
本发明公开了一种壳聚糖酶OUC‑CsnCA，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了编码该壳聚糖酶OUC‑CsnCA的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。所述壳聚糖酶OUC‑CsnCA在降解壳聚糖/制备壳寡糖中的应用，在制备降解壳聚糖的酶制剂中的应用。本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnCA，用于降解壳聚糖产生壳寡糖，其最适pH为8.0，最适反应温度为55℃，比酶活为1786.227U/mg；酶活和产酶水平高，纯化后蛋白浓度为1.284mg/ml,相较于已报道的壳聚糖酶具有一定的优势本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnCA具有重要的工业应用价值及经济价值。
本发明公开了壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49I及其应用和制备壳寡糖的方法，属于壳聚糖酶技术领域。所述壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49I的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。所述壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49I在制备壳寡糖中的应用，所述壳寡糖的聚合度为2～5。所述制备壳寡糖的方法，以壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49I降解壳聚糖得到壳寡糖，壳寡糖的聚合度为2～5。本发明的壳聚糖酶OUC‑CsnA4‑S49I具有产物特异性，降解壳聚糖可得到高聚合度的壳寡糖。本发明拓宽了GH 46家族的壳聚糖酶酶解壳聚糖的产物谱，可用于制备高聚合度的壳寡糖，应用潜力巨大，应用前景广阔。
