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[发明专利]一种绵羊VASA基因报告载体的构建方法及其应用-CN202310501774.1在审
发明人：张艳丽;杨花;刘孜斐;王锋 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2023-05-06 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种绵羊VASA基因报告载体的构建方法及其应用，本发明的目的是利用CRISPR/Cas9技术，构建VASA基因的报告载体，并利用CRISP/dCas9系统在成纤维细胞验证敲入载体的有效性。本发明载体的构建方法是：①构建EGFP‑PGK puro‑VASA报告载体；②基于VASA基因外显子序列设计靶向gRNA序列，并构建Cas9‑gRNA敲入载体，共同进行成纤维细胞转染；③利用CRISPR/dCas9激活系统激活VASA基因表达。通过本发明，可以实现外源基因VASA在绵羊成纤维细胞中的激活表达，为进一步探索生殖特异性基因的功能提供研究基础。
一种绵羊 vasa 基因报告载体构建方法及其应用

[发明专利]一种基因工程恶臭假单胞菌及其构建方法与应用-CN201410180577.5有效
发明人：许平;于浩;唐鸿志;马翠卿 -专利权人：上海交通大学
申请日： 2014-04-30 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N15/78 文献下载
摘要：本发明公开了一种基因工程恶臭假单胞菌及其构建方法与应用。本发明对恶臭假单胞菌XPSN进行基因改造，构建6‑羟基‑3‑琥珀酰吡啶3‑羟化酶基因失活的基因工程恶臭假单胞菌P‑HSP。其构建方法包括步骤引物设计、PCR扩增、构建敲除用重组质粒pK18mob‑hspB、将重组质粒转移入大肠杆菌S17‑1、双亲杂交。本发明还将基因工程恶臭假单胞菌P‑HSP作为生物催化剂应用于尼古丁转化反应生产6‑羟基‑3‑琥珀酰吡啶中。本发明中构建的基因工程菌株转化效率高，操作简便，菌株传代稳定，能够重复使用三次，降低了反应成本，具有重要的工业应用价值。
一种基因工程恶臭假单胞菌及其构建方法应用

[发明专利]细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用-CN202111103040.5有效
发明人：苏晓鸥;黄苑;王瑞国;崔娜 -专利权人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
申请日： 2021-09-18 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本申请涉及细胞筛选模型构建技术领域，具体而言，涉及一种细胞筛选模型及其构建方法和应用、酵母菌及其制备方法和应用。细胞筛选模型的构建方法包括将报告基因表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中；将激素受体表达载体整合至宿主细胞本体的基因组中，或将激素受体表达载体以游离形式转入至宿主细胞内。激素受体表达载体包括强组成型启动子和激素受体基因；报告基因表达载体包括激素反应元件和报告基因Lux。本申请的细胞筛选模型的构建方法构建的细胞筛选模型无需添加细胞裂解液和外源性底物即能够自主、持续、稳定产生荧光响应信号，从而准确、可靠、直观地评价物质对激素受体的激动或拮抗活性。
细胞筛选模型及其构建方法应用酵母菌制备

[发明专利]一种真菌病毒诱导的基因沉默载体及其构建方法和应用-CN202310441503.1有效
发明人：郭立华;张理航;王双超;阮少键 -专利权人：中国农业科学院植物保护研究所
申请日： 2023-04-23 - 公布日： 2023-09-26 - 主分类号： C12N15/80 文献下载
摘要：本发明公开了一种真菌病毒诱导的基因沉默载体及其构建方法和应用，属于基因工程领域。该真菌病毒诱导的基因沉默载体的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，其构建方法包括(1)将真菌病毒FgGMTV1/HB58的3个单链环状DAN分子DNA‑A、DNA‑B和DNA‑C串联并导入同一载体，构建重组载体；(2)对所述重组载体中的DNA‑C分子的编码蛋白p26进行缺失突变，获取真菌病毒诱导的基因沉默载体。本发明构建通过缩短DNA‑A、DNA‑B和DNA‑C并串联后导入同一载体构建的基因沉默载体，经试验，结果显示该基因沉默载体可以有效控制小麦赤霉病，为小麦赤霉病的防控提供了新的方向。
一种真菌病毒诱导基因沉默载体及其构建方法应用

[发明专利]一种含组成型启动子pPGK和G418抗性基因的酿酒酵母表达载体及其构建方法-CN201110235211.X无效
发明人：周长林;曹喜涛;陈凯;窦洁;王慧;李扬;奚涛 -专利权人：中国药科大学
申请日： 2011-08-17 - 公布日： 2012-01-04 - 主分类号： C12N15/81 文献下载
摘要：本发明公开了一种含组成型启动子pPGK和G418抗性基因的酿酒酵母表达载体及其构建方法，其目的是解决目前酿酒酵母表达载体多以营养缺陷为筛选标记，难以在工业酵母菌株进行基因工程改造过程中使用这一难题。其构建方法步骤如下：克隆KanMX基因，与pYES2.0载体连接，构建质粒pYES-Kan1。同时，以酿酒酵母染色体DNA为模板，克隆pPGK启动子基因，将其与pYES-Kan1质粒连接，将其原来的pGAL诱导型启动子替换为pPGK启动子，从而构建组成型酿酒酵母表达质粒pPGK-KanMX。本发明操作简单，构建的质粒无需对工业酵母菌株进行营养缺陷改造即可进行基因操作，大大简化了酵母基因工程改造过程。
一种组成启动子 ppgk g418 抗性基因酿酒酵母表达载体及其构建方法

[发明专利]病毒诱导的基因沉默载体及其应用和柑橘病害防控的方法-CN202110957438.9在审
发明人：宋震;马志敏;宾羽;许建建;周常勇 -专利权人：西南大学
申请日： 2021-08-18 - 公布日： 2022-04-12 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明提供一种病毒诱导的基因沉默载体及其应用和柑橘病害防控的方法。所述基因沉默载体是基于柑橘叶斑驳病毒的侵染性克隆质粒而构建的。所述基因沉默载体是通过将目的基因片段整合到CLBV侵染性克隆质粒pCLBV201构建得到的重组质粒载体，目的基因片段优选反向连接在所述质粒载体pCLBV201中CLBV基因组cp基因终止子与3’UTR之间本发明提供的靶向柑橘lob基因的基因沉默载体阻断柑橘溃疡病菌与靶标基因结合，可以达到良好的溃疡病防控效果，并且成本低廉，环境友好。本发明构建的靶向CYVCV基因组不同ORF的基因沉默载体能够有效抑制CYVCV在植株内转录表达，进而实现对柑橘黄脉病的预防和控制。
病毒诱导基因沉默载体及其应用柑橘病害方法

[发明专利]杂交枫香基因编辑载体、其构建方法、及其应用-CN202210715444.8有效
发明人：张金凤;黄超;江帅菲;赵健;范英明;崔莹;包芬 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2022-06-22 - 公布日： 2023-07-04 - 主分类号： C12N15/84 文献下载
摘要：本发明公开了一种杂交枫香基因编辑载体、其构建方法及其应用方法，属于植物基因工程技术领域，设计2个靶点，以AtU3b和AtU3d为两个靶点的启动子，经过三轮PCR反应，构建杂交枫香PDS基因编辑载体pYLCRISPR/Cas9‑PDS；将构建的基因编辑载体转入胚性愈伤组织中并进行了鉴定，成功获得基因编辑事件。本发明建立杂交枫香基因编辑载体，对杂交枫香植物基因进行精确编辑，产生PDS基因的碱基缺失或替换，基因编辑效率高，本发明的在杂交枫香中能高效、多靶点基因编辑的基因编辑载体极大地促进杂交枫香植物基因功能研究及性状改良
杂交枫香基因编辑载体构建方法及其应用

[发明专利]一种基于后缀树算法的基因组测序序列与参考基因组比对的方法-CN202011599753.0在审
发明人：张静波;姬晓勇;高司航;单光宇;伍启熹;王建伟;刘倩;唐宇 -专利权人：北京优迅医疗器械有限公司
申请日： 2020-12-29 - 公布日： 2021-05-14 - 主分类号： G16B30/10 文献下载
摘要：本发明涉及生物信息技术领域，具体涉及一种基于后缀树算法的基因组测序序列与参考基因组比对的方法。本发明提供的基于后缀树算法的基因组测序序列与参考基因组比对的方法包括构建参考基因组索引以及将基因组测序序列与参考基因组索引进行序列比对的步骤，其中，所述构建参考基因组索引包括如下步骤：(1)构建参考基因组索引的初步后缀树；(2)将所述初步后缀树中含有分叉的节点转换成节点数字，不含有分叉的节点转换成节点矩阵，构建后续用于比对的最终后缀树。
一种基于后缀算法基因组序列参考方法

[发明专利]一种提高重组杆状病毒表面展示效率的方法-CN201610235815.7有效
发明人：孙京臣;郑浩;江自坚;徐亮亮;姚伦广;严会超 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2016-04-15 - 公布日： 2019-08-09 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高重组杆状病毒表面展示效率的方法，属于基因工程和蛋白工程领域。所述的方法包含如下基因片段：AcMNPV的gp64基因上游同源重组基因片段、下游同源重组基因片段、博莱霉素抗性基因片段、ires基因片段、野生型gp64基因片段；所述方法包含如下步骤：同源重组基因的构建、突变型rSw106‑inv菌株Ac‑Zeo‑Δgp64的构建、突变型rSw106‑inv菌株Ac‑Zeo‑Δgp64的鉴定、ires补偿性低量表达野生型GP64蛋白的转移载体的构建及转座、重组杆状病毒的构建和外源蛋白展示效率的检测
一种提高重组杆状病毒表面展示效率方法

[发明专利]一种高效的基因工程载体-CN201710331370.7有效
发明人：姜有为;李云飞;杜正伟 -专利权人：杭州菁因康生物科技有限公司
申请日： 2017-05-11 - 公布日： 2022-12-27 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明提供具有5’‑A1‑B1‑C‑B2‑A2‑D‑3’或5’‑D‑A1‑B1‑C‑B2‑A2‑3’所示结构的核苷酸构建物，其中A1、A2是同向重复序列，B1、B2是反向重复序列，C是标记基因，D是外源基因表达盒本发明还提供包含所述核苷酸构建物的表达载体以及在其基因组中整合有所述核苷酸构建物的宿主细胞。本发明的核苷酸构建物及载体通过两次重组而将大量外源基因整合在基因组中，能够有效循环使用选择标记，专一性地破坏基因组中的靶基因的表达，或者保持靶基因的正常表达，从而可广泛应用于完成基因组大规模改造项目。
一种高效基因工程载体

[发明专利]一种新型转座子突变株文库的构建系统-CN202011318980.1有效
发明人：杨洪江;李东航;秦旭颖;庞文静;张志强 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2020-11-23 - 公布日： 2023-02-28 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明涉及一种新型转座子突变株文库的构建系统，构建步骤如下：⑴构建一个在ITRs区域中额外添加了转座酶基因tnpA的新型转座子质粒载体；⑵在ITRs区域中额外添加的转座酶基因tnpA能够受到阿拉伯糖启动子基因araBAD和阿拉伯糖抑制蛋白基因araC调控；⑶获得一个含有转座子的不同物种的转座子突变株；⑷该转座子突变株在基因组的任一位置上具有一个转座子插入序列；⑸随机获得全基因组范围内多种插入基因形式的转座子突变株文库本发明构建系统可以系统高效地得到覆盖全基因组的革兰氏阴性菌转座子突变株文库，有助于研究基因组注释和功能分析。
一种新型座子突变文库构建系统

[发明专利]产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株及其构建方法-CN201210585411.2无效
发明人：余琼 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-12-31 - 公布日： 2013-04-10 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，涉及一种基因工程菌株及其构建方法。本发明的目的在于提供一种产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAPc2融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，该菌株可以生产CGRP-AcAPc2融合蛋白，该融合蛋白具有治疗高血压和抗血栓双重作用。该基因工程菌株含有融合蛋白CGRP/AcAPc2基因。方法：一、融合蛋白CGRP/AcAPc2基因的合成；二、重组表达载体构建；三、将重组表达载体转化到大肠杆菌中，提取转化菌质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，基因测序，测序结果正确的为阳性重组菌。
降钙素基因相关钩虫抗凝 acapc2 融合蛋白基因工程菌株及其构建方法

[发明专利]产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAP5融合蛋白基因工程菌株及其构建方法-CN201210585662.0无效
发明人：余琼 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-12-31 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAP5融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，涉及一种基因工程菌株及其构建方法。本发明的目的在于提供一种产降钙素基因相关肽与犬钩虫抗凝肽AcAP5融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，该菌株可以生产CGRP-AcAP5融合蛋白，该融合蛋白具有治疗高血压和抗血栓双重作用。该基因工程菌株含有融合蛋白CGRP/AcAP5基因。方法：一、融合蛋白CGRP/AcAP5基因的合成；二、重组表达载体的构建；三、将重组表达载体转化到大肠杆菌中，提取转化菌质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，基因测序，测序结果正确的为阳性重组菌。
降钙素基因相关钩虫抗凝 acap5 融合蛋白基因工程菌株及其构建方法

[发明专利]产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法-CN201210534878.4无效
发明人：余琼 -专利权人：黑龙江大学
申请日： 2012-12-12 - 公布日： 2013-03-13 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，涉及一种基因工程菌株及其构建方法。本发明的目的在于提供一种产成骨生长肽与降钙素基因相关肽融合蛋白基因工程菌株及其构建方法，该菌株可以生产OGP-CGRP融合蛋白，该融合蛋白具有治疗骨质疏松症和心肌缺血双重作用。该基因工程菌株含有融合蛋白OGP/CGRP基因。方法：一、融合蛋白OGP/CGRP基因的合成；二、重组表达载体的构建；三、将重组表达载体转化到大肠杆菌中，随机挑取转化菌，提取质粒DNA，用KpnⅠ单酶切，进行基因测序，测序结果正确的即为阳性重组菌。
产成骨生长降钙素基因相关融合蛋白基因工程菌株及其构建方法

[发明专利]用于基因治疗的含杂交启动子的核酸构建体-CN97119658.3无效
发明人： K－H·塞法特;R·穆勒;H－H·斯德拉斯克 -专利权人：赫彻斯特股份公司
申请日： 1997-09-23 - 公布日： 1998-04-22 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：用于基因治疗和基因操作的含杂交启动子的核酸构建体。本发明涉及用于在宿主细胞中精确调节基因表达之核酸构建体,这种构建体显示出至少一种抑制所表达的基因正常表达的突变,并且显示出至少另一种消除由第一突变产生的抑制作用的第二突变;本发明还涉及一种分离的细胞,这种细胞含有所述的核酸构建体;本发明也涉及这种核酸构建体在制备药物和治疗具有过量细胞增殖疾病上的用途。
用于基因治疗杂交启动子核酸构建