本申请属于生物技术领域,尤其涉及一种四肽‑9的合成方法。本申请的合成方法,包括:构建含有融合蛋白的表达载体质粒;融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列;融合蛋白含有用于纯化蛋白的亲和层析标签;将表达载体质粒转化至宿主菌中,并使宿主菌诱导表达融合蛋白;将表达融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理,得到含有融合蛋白的菌液;将菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化,然后在亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活融合蛋白的内含肽进行自切割,得到四肽‑9。本申请提供了一种四肽‑9的合成方法,有效解决目前四肽‑9合成困难、产量低和纯化成本高等问题。