本发明提供了一种从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法,包括以下步骤:S1、血液中单核细胞增生李斯特菌基因组DNA的提取;S2、PCR检测:S2.1、利用单核细胞增生李斯特菌基因组DNA序列设计特异性的PCR引物,PCR引物包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物;S2.2、以提取的单核细胞增生李斯特菌基因组DNA为模板,采用PCR引物进行PCR扩增;S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测,扩增出长度为106bp的片段则判定为检测出单核细胞增生李斯特菌病原菌。本发明对血液中单核细胞增生李斯特菌感染的检测极限达到10CFU/mL。本发明实现了对临床血液中单核细胞增生李斯特菌感染的快速灵敏诊断。
本发明的目的是提供一种单核细胞增生李斯特氏菌的实时浊度LAMP快速检测方法,从而弥补现有技术的不足。本发明首先提供一种用于检测单核细胞增生李斯特氏菌的LAMP引物组,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1-4。本发明针对单核细胞增生李斯特氏菌的溶血素基因设计一套LAMP引物,利用实时浊度仪对单核细胞增生李斯特氏菌进行检测,并验证检测方法的特异性和灵敏度,从而建立快速、特异、灵敏的单核细胞增生李斯特氏菌LAMP
本发明涉及一种基于核酸层析生物传感技术检测单核细胞增生李斯特氏菌的方法,根据单核细胞增生李斯特氏菌的毒力基因hlyA,设计环介导等温扩增引物(SEQ ID NO1‑4),结合纳米酶核酸试纸条,建立一种基于LAMP纳米酶传感器的单核细胞增生李斯特氏菌检测方法。本方法可成功地用于区分活菌细胞和死菌细胞,对单核细胞增生李斯特氏菌的检测下限可达10CFU/mL。
本发明涉及一种宽宿主谱李斯特菌噬菌体及其作为生物杀菌剂在食品中的应用。分离的单核细胞增生性李斯特菌噬菌体命名为LipG2-5(保藏号CCTCC M 2010003),对单核细胞增生性李斯特菌、英诺克李斯特菌及威尔氏李斯特菌均具有强裂解活性,其分离培养物及复配制剂能够作为食品添加剂防控食品中李斯特菌的污染
本发明提供了一种sigB基因缺失的减毒单核细胞增生李斯特氏菌,其保藏编号为CCTCC M 2016522。本发明还提供了一种疫苗,含有上述的一种基因敲除减毒单核细胞增生李斯特氏菌。本发明还提供了一种抗体,由上述一种基因敲除减毒单核细胞增生李斯特氏菌免疫产生。还提供了上述一种基因敲除减毒单核细胞增生李斯特氏菌的制备方法。本发明在构建单核细胞增生李斯特氏菌减毒菌株菌株的过程中,首先利用同源重组技术对标准菌株EGD‑e进行减毒得到李斯特减毒菌株EGD‑e△sigB,然后从生长速度、毒力基因表达水平及细胞侵袭生物学方面等方面研究