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[发明专利]一种犬干扰素的制备方法-CN201811563406.5有效
发明人：李守军;王甜;孙晨;付旭彬;王艳晓 -专利权人：天津瑞普生物技术股份有限公司
申请日： 2018-12-20 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供了一种犬干扰素的制备方法，该方法通过培养携带犬干扰素基因的重组质粒的大肠杆菌获得种子液，并以一定浓度接种菌液，然后经低温诱导获得发酵菌液，发酵菌液经离心收菌体，菌体经破碎离心收获包涵体，包涵体经洗涤、重悬、低温静水压复性和层析纯化后获得犬干扰素，该方法的优势在于采用低温诱导结合低温静水压复性提高包涵体复性率和蛋白活性。
一种干扰素制备方法

[发明专利]蜜蜂肽聚糖识别蛋白的制备方法-CN201710391140.X在审
发明人：刘彦杰;黄家兴;安建东;张红;何峰;赵晓蒙 -专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所
申请日： 2017-05-27 - 公布日： 2017-10-10 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种蜜蜂肽聚糖识别蛋白的制备方法，包括1)、将蜜蜂PGRP‑SA的基因片段连接表达载体并转化至大肠杆菌进行表达，收集表达得到的包涵体蛋白；2)、将所述包涵体蛋白洗涤后加入蛋白变性剂溶解，随后用复性液进行复性处理；3)、将蛋白浓缩后依次经分子筛柱和阴离子交换柱洗脱纯化。本发明对蜜蜂PGRP‑SA蛋白表达条件进行了优化，优选了各过程中重要试剂的配方，结合采用层析法复性，方法简单快速，操作过程温和，对蛋白损伤小，获得了高纯度的活性蛋白质。
蜜蜂肽聚糖识别蛋白制备方法

[发明专利]熊蜂肽聚糖识别蛋白的制备方法-CN201710390011.9在审
发明人：刘彦杰;安建东;黄家兴;孙成;丁桂玲 -专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所
申请日： 2017-05-27 - 公布日： 2017-08-29 - 主分类号： C07K14/705 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种熊蜂肽聚糖识别蛋白的制备方法，包括1)、将熊蜂PGRP‑SA的基因片段连接表达载体并转化至大肠杆菌进行表达，收集表达得到的包涵体蛋白；2)、将所述包涵体蛋白洗涤后加入蛋白变性剂溶解，随后用复性液进行复性处理；3)、将蛋白浓缩后依次经分子筛柱和阴离子交换柱洗脱纯化。本发明对熊蜂PGRP‑SA蛋白表达条件进行了优化，优选了各过程中重要试剂的配方，结合采用层析法复性，方法简单快速，操作过程温和，对蛋白损伤小，获得了高纯度的活性蛋白质。
熊蜂肽聚糖识别蛋白制备方法

[发明专利]牛胰蛋白酶的生产工艺-CN201610005823.2有效
发明人：张维;李树宝;杜敬 -专利权人：北京志道生物科技有限公司
申请日： 2016-01-05 - 公布日： 2021-01-15 - 主分类号： C12N9/76 文献下载
摘要：本发明提供一种牛胰蛋白酶的生产工艺，利用基因重组技术，通过在大肠杆菌中表达出牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白的包涵体蛋白，然后进行酸化处理将包涵体蛋白变、复性为折叠好的牛胰蛋白酶原或牛胰蛋白酶原融合蛋白，采用原核表达系统表达量高，变性、复性及后续纯化步骤简单易行，工艺成本低。制备的有活性的牛胰蛋白酶可用于重组人胰岛素及胰岛素类似物的生产。
胰蛋白酶生产工艺

[发明专利]一种重组蛋白的高效变复性的方法-CN200510134573.4有效
发明人：林键;秦超;李胜峰 -专利权人：百奥泰生物科技(广州)有限公司
申请日： 2005-12-19 - 公布日： 2006-05-24 - 主分类号： C07K1/08 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组蛋白的高效变复性的方法，对重组表达而不具有生物活性的蛋白质进行了高效快速的变复性。通过采用含有尿素和一定浓度比例的氧化还原剂GSSH/GSH等组成的变性缓冲液对充分洗涤后的包涵体蛋白进行溶解，随后将变性蛋白稀释注入含有L－精氨酸和一定浓度比例的氧化还原剂GSSH/GSH等组成的复性缓冲液中进行复性，并在复性过程中逐步提高缓冲液中氧化还原剂GSSH/GSH的比例及调低pH，直至复性结束。经该方法复性的几种在大肠杆菌中表达并形成包涵体的蛋白质，其生物活性强且稳定，因此是工业化高效变复性的方法。
一种重组蛋白高效复性方法

[发明专利]一种含未复性重组蛋白的生物制剂及其制备方法与应用-CN200810014363.5有效
发明人：厉保秋 -专利权人：山东大学
申请日： 2008-03-10 - 公布日： 2008-08-20 - 主分类号： A61K38/17 文献下载
摘要：本发明提供了一种含未复性重组蛋白的生物制剂及其制备方法与应用，制备方法为：先制备包涵体，然后将包涵体蛋白在变性条件下分离纯化，得到高纯度的、未复性的、不溶于水的重组蛋白，再与其它医学上可接受的辅液混匀，本发明具有以下优点：1.只对重组蛋白进行纯化，不进行体外复性，省略了繁琐的复性过程，成本低、产品收率高；2.将纯化处理后的未复性的重组蛋白直接制成生物制剂供静脉注射用，重组蛋白在体内会逐渐复性、逐步发挥药理作用
一种复性重组蛋白生物制剂及其制备方法应用

[发明专利]一种WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的变复性方法-CN201210468427.5有效
发明人：李鹏;严洁;马晓燕;周开亚 -专利权人：南京师范大学
申请日： 2012-11-19 - 公布日： 2013-02-13 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的变复性方法。其内容包括：1）向WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体中加入8M尿素的10mMTris-HCl，pH8.0，剧烈搅动，25℃下用磁力搅拌器不断搅拌3-4小时，使沉淀缓慢溶解；2）4℃，12000rpm离心12min，弃沉淀；3）在所得上清液中加入pH8.0的磷酸盐缓冲液，以pH8.0的磷酸盐缓冲液透析20-22小时，然后用PEG-20000浓缩得可溶性蛋白。利用本发明，WSSV囊膜蛋白原核表达包涵体的复性效率均达到了95%以上，获得了可溶性蛋白。
一种 wssv 膜蛋白表达包涵复性方法

[发明专利]一步加热法溶解重组蛛丝蛋白包涵体的方法-CN201910603896.5有效
发明人：齐兴梅;熊思东;蔡慧 -专利权人：苏州大学
申请日： 2019-07-05 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明涉及一种一步加热法溶解重组蛛丝蛋白包涵体的方法，包括以下步骤：将重组蛛丝蛋白包涵体悬浮于含有尿素的缓冲液中，得到悬浮液，所述悬浮液中尿素的浓度为2‑4M，所述缓冲液的pH为5‑10，然后将所述悬浮液加热至40～100℃，使重组蛛丝蛋白包涵体蛋白溶解，离心后分离出上清液，即得到可溶重组蛛丝蛋白。本发明的方法操作简单，在低浓度变性剂的作用下，简化了蛋白纯化和复性步骤，只需一步操作即可从包涵体中得到可溶的纯净重组蛛丝蛋白，节约了时间，降低了成本。
一步加热溶解重组蛛丝蛋白包涵方法

[发明专利]一种重组人骨形成蛋白－2的表达方法-CN200610032800.7无效
发明人：汪炬;孙奋勇;戴云;谢秋玲 -专利权人：暨南大学
申请日： 2006-05-13 - 公布日： 2006-11-29 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人骨形成蛋白－2的表达方法。包括目的基因hBMP－2的合成；用Nde I和BamH I双酶切hBMP－2基因与载体，连接构建重组载体，转化宿主菌，构建hBMP－2基因工程菌；培养hBMP－2基因工程菌，分离、清洗、溶解包涵体得到包涵体溶解液；纯化包涵体；复性；超滤、透析、冻干得到重组人骨形成蛋白－2。本发明工艺简便，成本低，产量高，活性好，复性率可达到60％左右，在产业化生产上具有优势，适于大规模生产。
一种重组形成蛋白表达方法

[发明专利]重组驼源血清白蛋白的制备方法-CN202110096564.X有效
发明人：陈进;张嘉容;裴巍;蔡铃;徐其兰;姜慧君 -专利权人：南京医科大学
申请日： 2021-01-25 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C07K14/765 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组驼源血清白蛋白的制备方法，包括质粒构建、转化并表达、包涵体复性、以及纯化。本发明采用以大肠杆菌为基础的原核表达系统，通过质粒构建、转化并表达、包涵体复性、纯化的主要步骤，实现采用原核表达系统成功表达重组驼源血清白蛋白的目的，所得血清白蛋白水溶性良好，具有纯度高、安全性高、性价比高等优点，有望成为人源血清白蛋白的替代品，以满足患者对血清白蛋白的需求。
重组血清白蛋白制备方法

[发明专利]一种重组人干扰素-κ包涵体的纯化和复性方法-CN202011560333.1有效
发明人：彭继先;李振森;晁香君;吴桂苹;韩景花 -专利权人：山东睿鹰制药集团有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-09-09 - 主分类号： C07K14/555 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人干扰素‑κ包涵体的纯化和复性方法。所述方法包括：将人干扰素kappa(hIFN‑κ)的编码基因通过密码子优化转化大肠杆菌，构建基因工程菌，所构建的基因工程菌经诱导，以包涵体的方式高效表达重组人干扰素hIFN‑κ，经过纯化复性，获得高纯度的具有抗病毒活性的本发明的纯化及复性方法实现了88％以上的包涵体纯度和60％以上的hIFN‑κ蛋白收率，操作简单且适于大规模生产。
一种重组干扰素包涵纯化复性方法

[发明专利]一种马鹿胰岛素样生长因子表达纯化工艺-CN201610325340.0在审
发明人：党平;杜雨威;王瑜;宋平 -专利权人：上海蓝庄生物医药科技有限公司
申请日： 2016-05-16 - 公布日： 2016-08-03 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：基因片段和PET32a质粒构建重组质粒；对重组质粒进行扩增，筛选出单克隆阳性的重组质粒；将单克隆阳性的重组质粒转化入BL21(DEa)大肠杆菌中得到重组子，在培养基中通过重组子进行deer‑IGF‑Ⅰ蛋白诱导表达；将重组子的菌体从培养基中分离，并在破菌缓冲液中，进行破菌，使deer‑IGF‑Ⅰ蛋白以包涵体的表达形式进入破菌缓冲液，并将包涵体与破菌缓冲液分离；用变性剂使包涵体变性为可溶性融合蛋白溶解在变性剂中，将变性剂逐滴加入蛋白复性液，对变性剂中的可溶性融合蛋白进行复性；再对复性后的可溶性融合蛋白进行纯化和酶切，得到deer‑IGF‑Ⅰ蛋白；对deer‑IGF‑Ⅰ蛋白进行纯化、透析除盐和浓缩。
一种马鹿胰岛素生长因子表达纯化工艺

[发明专利]一种重组人IL-24蛋白的PEG修饰方法-CN201710414629.4有效
发明人：江红;马群风;郑晓飞;张耀;王俊峰;张驰;史亦南;葛建林;化计磊 -专利权人：北京交通大学
申请日： 2017-06-05 - 公布日： 2020-12-01 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。
一种重组 il 24 蛋白 peg 修饰方法

[发明专利]包涵体蛋白复性并同时纯化的方法-CN01141501.0有效
发明人：苏志国;李明 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2001-09-27 - 公布日： 2003-04-16 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及的包涵体蛋白复性并同时纯化的方法，为将溶解的包涵体蛋白在离子交换层析柱中进行变性剂浓度的梯度洗脱或pH值梯度洗脱或同时进行变性剂浓度梯度洗脱和pH值梯度洗脱；其具体步骤是1)用酸性/碱性流动相I或者其它溶液溶解的包涵体蛋白，进入到流动相I平衡的离子交换层析柱中，包涵体蛋白可逆地被吸附在层析介质上；2)然后用碱性/酸性流动相II梯度取代流动相I进行梯度长度为1－5柱体积，流动相II中的变性剂的浓度低于流动相I中的变性剂的浓度，其蛋白可获得高浓度下的高活性回收，同时此过程对不纯的包涵体蛋白有纯化作用。
包涵蛋白复性同时纯化方法

[发明专利]细胞因子白介素21的纯化方法及其应用-CN202310483288.1在审
发明人：崔志辉;童路;王琨;谭新勇;冷兆武 -专利权人：南京优爱生物科技研发有限公司
申请日： 2023-04-28 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：该纯化方法是以获得的白介素21包涵体为基础，通过清洗、变性、阳离子柱粗纯、复性和阳离子柱精纯的方法获得白介素21，在该纯化方法中，复性前先通过阳离子柱粗纯提高了目的蛋白白介素21的纯度，从而提高了复性效率，使得目的蛋白收率进一步提高，在复性后仅需一步阳离子柱精纯便可将目的蛋白的纯度提高至98％以上。该层析工艺用于通过包涵体复性纯化的方式制备白介素21，可以大大提高白介素21的纯度，且提高白介素21的产量。
细胞因子白介素 21 纯化方法及其应用