[发明专利]天然组织来源的脱细胞骨膜基质凝胶材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种天然组织来源的脱细胞骨膜基质凝胶材料的制备方法，本发明将哺乳动物来源的脱细胞骨膜基质通过冷冻干燥，最大化保留生物活性分子；并将其研磨成粉、控制粉末粒径，增加溶液接触面积从而加速消化，得到具有良好成骨活性潜力的标准统一化的脱细胞骨膜基质凝胶。此外，通过EDC交联生长因子，对实现新生骨组织的优异再生、血管化长入具有很好的促进效果。可用于修复临床上各类病因造成的骨缺损，骨不愈合等多种骨再生障碍问题。

主权项

1.天然组织来源的脱细胞骨膜基质凝胶材料的制备方法，其特征在于：a)将初步去除骨膜周边肌肉、筋膜和脂肪作为原材料；b)将骨膜组织材料用无菌水漂洗3次，每次20分钟，去除残余的肌肉、筋膜和脂肪，用24kGy剂量的γ射线照射24h，杀灭存在的细菌和病毒；c)将b)得到的材料经磷酸三丁酯与去离子水处理12‑24小时；磷酸三丁酯与去离子水的体积比为1％‑5％；d)将c)得到的材料浸泡于浓度为1％TritonX‑100溶液中，恒温23℃摇床200rpm震荡12小时，用无菌水漂洗3次，每次20分钟，去除残留TritonX‑100溶液；e)将d)得到的材料浸泡于摩尔浓度为1％SDS溶液中，恒温23℃摇床200rpm震荡2小时，用ddH₂O流动冲洗12小时，去除残留SDS溶液；f)将e)得到的材料浸泡于含KCl的PBS缓冲液中8小时，KCl的浓度为2M；g)将f)得到的材料浸泡于含KI的PBS缓冲液中10小时，KI的浓度为2M，ddH₂O流动冲洗12小时去除残留PBS缓冲液；h)将g)得到的材料辐照灭菌；将g)得到的材料经γ射线照射10‑48小时，杀灭可能存在的细菌和病毒；i)将h)得到的材料冷冻干燥；将灭菌后的材料先放入‑80℃冰箱预冷后，放入冷冻干燥机干燥24小时，保持真空度为1.5mtorr，温度‑50℃；j)将i)得到的材料磨粉将冻干的材料转移到研磨器中，研磨机频率为60HZ，设定时间1分钟，经液氮冷冻，研磨成粉末，过40‑100目筛网，收集冻干组织粉末；k)将j)得到的材料凝胶；将将j)得到的粉末浸泡于冰醋酸溶液中，加入胃蛋白酶，常温消化24‑72小时，待完全消化，溶液500×g离心10min，去除杂质后用NaOH溶液调节pH至7.4左右，即得骨膜ECM凝胶材料，4℃保存。