[发明专利]一种猪源产气荚膜梭菌致病性试验方法在审
| 申请号： | 201910557213.7 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN110241188A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 郝海红;袁宗辉;罗讯;徐紫慧;黄玲利;王玉莲;彭大鹏;王旭;陈冬梅;陶燕飞;潘源虎;谢书宇;程古月;瞿玮;刘振利;谢长清;房诗薇;黄啸 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/04;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 戴凤仪 |
| 地址： | 430070 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种猪源产气荚膜梭菌致病性试验方法，属于生物技术领域。所述方法包括攻毒菌株的增菌传代培养，试验动物的攻毒和观察以及细菌的分离与鉴定三部分。其中细菌增菌培养基选择液体硫乙醇酸盐培养基(FT)，传代培养基选择强化布氏血琼脂培养基，可有效增加细菌攻毒菌数量并且缩短细菌培养时间。攻毒方式为攻毒菌液腹腔注射法，攻毒8h后即观察到动物的发病和死亡现象。解剖发病及死亡动物病变组织，接种于选择性培养基胰胨‑亚硫酸盐‑环丝氨酸琼脂基础(TSC)进行分离培养，挑取菌落形态明确的单菌落，接种于FT中进行增菌培养，使用多重PCR方法鉴定分离细菌。所述方法简单且成本低，试验方法可行，试验结果准确可靠。 | ||
| 搜索关键词： | 产气荚膜梭菌 致病性试验 细菌 种猪 接种 生物技术领域 选择性培养基 血琼脂培养基 传代 腹腔注射法 培养基选择 增菌培养基 病变组织 传代培养 方法鉴定 分离培养 分离细菌 菌落形态 琼脂基础 试验动物 死亡动物 死亡现象 细菌培养 亚硫酸盐 乙醇酸盐 增菌培养 培养基 多重PCR 单菌落 丝氨酸 液体硫 布氏 观察 胰胨 增菌 解剖 试验 | ||
【主权项】：
1.一种猪源产气荚膜梭菌的致病性试验方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)攻毒菌株的增菌及传代培养：将猪源产气荚膜梭菌置于FT肉汤中复苏，平板划线于强化布氏血琼脂培养基上传代培养，挑单菌落于FT培养基中增菌培养，得增菌培养液；(2)攻毒与观察：取所述增菌培养液腹腔注射试验动物，观察动物的发病及死亡情况；(3)攻毒菌株的分离与鉴定：对发病和死亡动物病变部位进行解剖，涂布于选择培养基中分离，并对分离株进行鉴定，当鉴定结果与攻毒菌株相同时，可判定攻毒菌株为致病性产气荚膜梭菌。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华中农业大学，未经华中农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910557213.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法-201910752205.8
- 张鹏 - 皖南医学院弋矶山医院
- 2019-08-08 - 2019-11-12 - C12Q1/686
- CRE菌株碳青霉烯酶检测方法的性能评估方法，包括以下步骤；步骤1：检测碳青霉烯酶基因，PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳仪上进行电泳确认；步骤2：改良Hodge试验以厄他培南为检测底物，产碳青霉烯酶；步骤3：取TSB肉汤，一管为mCIM试验管，另一管加入EDTA溶液作为eCIM试验管，用接种环刮取满环血平板上过夜培养的受试菌菌株，分别加入上述TSB肉汤中，震荡混匀；得到得到含有受试菌的菌液；步骤4：将美罗培南纸片浸入菌液中；步骤5：制备菌悬液并均匀涂布M‑H琼脂平板，干燥；步骤6：接种环将步骤4得到的美罗培南纸片取出并挤去多余菌液，贴至上述M‑H琼脂板上，温育，量取抑菌圈直径；本发明提高对耐碳青霉烯酶菌株筛选的有效性。
- 一种快速鉴定小鼠基因型的方法-201910736276.9
- 姚茂金;任娇艳;曹家宁 - 中新国际联合研究院
- 2019-08-09 - 2019-11-05 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种快速鉴定小鼠基因型的方法。该方法包括：将待测小鼠的组织加入NaOH溶液中，加热，得到混合液，调节混合液的pH为7.6~8.0，离心，得到样品DNA提取液；将样品DNA提取液、目标基因型的引物溶液及PCR反应液混合均匀，进行PCR反应，得到PCR产物；将PCR产物进行电泳处理，得到电泳结果图，根据所述电泳结果图判断待测小鼠的基因型，如果电泳结果图上出现了条带结果，则判断待测小鼠的基因型为目标基因型，如果电泳结果图上没有出现条带结果，则判断待测小鼠的基因不是目标基因型。该方法减少了传统DNA提取的繁琐步骤，在小鼠样本数量较多或需鉴定的等位基因较多时，可显著提高实验的效率。
- 单拷贝转基因家蚕品系的纯合方法-201610938496.6
- 张雨丽;赵爱春;张桂征;龙定沛;闭立辉;向仲怀;韦伟;韦博尤;黄文功;鲁成;苏红梅;黄玲莉;蒙艺英 - 广西壮族自治区蚕业技术推广总站;西南大学
- 2016-10-31 - 2019-11-05 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种单拷贝转基因家蚕品系的纯合方法，采用累代单蛾区饲养、标记基因筛选、雄蛾测交、雌蛾进行PCR扩增和后期与常规品种杂交检测相结合来进行单拷贝转基因家蚕纯合品系的筛选。该法操作技术要求低，缩短了获得基因型纯合的转基因家蚕所需的时间，所得纯合品系后代的转基因表达率均在98％以上。应用本发明进行转羊毛KAP5.4基因家蚕纯合品系的筛选和培育，在3代内就能筛选出所需的纯合系，大大缩短了育种周期。因此，本发明可高效筛选获得单拷贝转基因家蚕纯合品系，为转基因家蚕品种的培育提供重要的技术支撑，若广泛应用于转基因家蚕品种培育研究可为培育综合经济性状优良的转基因家蚕品种奠定坚实的基础。
- 确定人群样本生物指标集、预测生物学年龄的方法及其应用-201780084324.X
- 齐彦伟;柴相花;李伟阳;聂超;王书元;陈志华;张现东;李尉;甄贺富;谭美华;张爱萍;张彩芬;李睿;赵昕 - 深圳华大生命科学研究院
- 2017-01-25 - 2019-10-29 - C12Q1/686
- 提供了确定待测个体生物学年龄的方法及其应用，其中该方法包括以下步骤：根据前面所述的确定人群样本的生物学年龄预测生物指标集的方法，确定待测个体所属人群样本的以性别年龄分类的各生物学年龄预测生物指标集；基于待测个体对应的以性别年龄分类的生物学年龄预测生物指标集，计算所述待测个体的生物学年龄初步估计值DAEC；以及以不同人群的样本年龄分布数据为参照，对所述生物学年龄初步估计值DAEC进行最大后验概率计算处理，以便确定所述待测个体的预测生物学年龄DA。
- 通过细菌宏基因组分析来诊断肺癌的方法-201780080645.2
- 金润根 - MD保健株式会社
- 2017-12-21 - 2019-10-25 - C12Q1/686
- 本发明涉及通过细菌宏基因组学分析诊断肺癌的方法，更具体地，涉及通过使用来源于受试者的样品执行细菌宏基因组并且通过分析来自特定细菌的细胞外囊泡的含量的增加或减少来诊断肺癌的方法。从环境中存在的细菌分泌的细胞外囊泡可以被吸收到体内并直接影响癌症的发生，并且肺癌在任何症状出现之前很难早期诊断，这使得有效治疗变得困难。因此，通过使用根据本发明的来源于人体的样品对存在于来源于细菌的细胞外囊泡中的基因进行宏基因组分析，可以预先预测肺癌发病的风险，从而能够进行肺癌风险组的早期诊断和预测，并且通过适当的护理延迟发病时间或预防发病，即使在发病后仍可进行早期诊断，其可降低肺癌的发病率，提高治疗效果。
- 用于减少引物延伸反应中产生的冗余分子条形码的方法和组合物-201880015238.8
- 刘至东;刘国英;刘觉辉;谌涛 - 佰隆基因公司
- 2018-01-10 - 2019-10-25 - C12Q1/686
- 通过减少在模板依赖性引物延伸反应中形成的冗余分子条形码来向DNA片段上引入受控数量的分子条形码以及从两条DNA链找出变异频率的方法、组合物、系统和试剂盒。本文描述的方法、组合物、系统和试剂盒可包括一种或多种单链DNA特异性核酸酶或者包括一种或多种单链DNA特异性核酸酶的使用，所述核酸酶切割扩增产物中含有不匹配碱基对的单链区。
- 一种用于检测HLA-B*35:01基因的方法、特异性引物组及试剂盒-201910538108.9
- 李超鹏;赵洪斌;刘雅婷;陈露露;李晓晖;余鹏;欧阳冬生 - 长沙都正医学检验有限责任公司
- 2019-06-20 - 2019-10-22 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种用于检测HLA‑B*35:01基因的方法、特异性引物组及试剂盒，所述方法包括以下步骤：S1、取全血样本，提取全血样本中的DNA；S2、将步骤S1得到的DNA样本加入用于扩增HLA‑B*35:01基因的特异性引物组，混匀后设置仪器反应流程和参数进行PCR扩增检测；S3、检测扩增反应后的产物，确定样本基因的序列中是否含有HLA‑B*35:01基因序列，其中，所述特异性引物组包括引物组1或引物组2，所述引物组1包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的引物1和核苷酸序列如SEQ ID No.2所示的引物2，所述引物组2包括核苷酸序列如SEQ ID No.4所示的引物3和核苷酸序列如SEQ ID No.5所示的引物4。
- 一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用-201910743587.8
- 龚睿;沈超;杨媚媚;周艳;董迪迪;夏司璇 - 湖北国际旅行卫生保健中心;武汉大学
- 2019-08-13 - 2019-10-22 - C12Q1/686
- 本发明提供了一种用于鸡来源细胞PCR检测的引物组、试剂盒及应用，属于细胞学技术领域。本发明所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明采用聚合酶链式反应，能够扩增出鸡来源细胞的特异条带，进而快速、准确的检测出鸡来源的细胞。本发明的试剂盒和检测方法具有耗时短，操作简单、稳定性好等优点。
- 一种检测CRISPR-Cas9脱靶效应的方法-201910583154.0
- 邓涛;李倩;卢铀;喻堃;王越 - 成都美杰赛尔生物科技有限公司
- 2019-07-01 - 2019-10-18 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种检测CRISPR‑Cas9脱靶效应的方法，属于基因工程技术领域，其步骤包括：a.采用软件预测sgRNA的脱靶位点，并获得PCR扩增引物；b.选取基因样本，所选基因样本包括基因编辑样本和未进行基因编辑样本；c.PCR扩增预测出的脱靶位点；d.对PCR产物进行高通量测序；e.结果分析，序列比对；本发明根据指定的比对规则，将所述基因编辑后的样本与未进行基因编辑的对照样本进行比对，而不仅仅和数据库中的信息进行比对，也不需要获得子代或亲本样本基因信息，实现个性化的找寻细胞基因组上的可能脱靶位点，提高脱靶检测的准确度和灵敏度，从而提高了基因编辑的安全性。
- 一种用于检测细菌的杂交干扰实时PCR方法-201810895495.7
- 徐华;张嫄;王满妮;左琴琴;彭鹏;王锦;褚晓月;张薇薇;毛娟;兰静 - 西安市中心血站
- 2018-08-08 - 2019-10-15 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种用于检测细菌的杂交干扰实时PCR方法，该方法如下：将等体积量的基础DNA模板和等量无菌双蒸水混合作为对照组；将等体积量的基础DNA模板和待检样本提取物混合为检测组；在检测组和对照组中加入引物试剂，在实时荧光定量PCR仪器中进行扩增反应，观察检测组和对照组中基础模板的Ct值，当检测组相对对照组中的对照组中的基础模板的Ct值变大，则得出待检样本中存在对扩增起到干扰作用的细菌DNA。所述方法用于非疾病诊断目的。反应体系只需要一对引物，DNA扩增酶为普通的扩增酶，在检测过程中，只需要在体系中加入待检的样本，接观察循环阈值的变化即可判定是否有细菌的DNA存在。
- 基于两步法PCR的甲烷/氨氧化细菌群落结构分析方法-201510743453.8
- 全哲学;王建功;杰马纳;夏飞 - 复旦大学
- 2015-11-05 - 2019-10-15 - C12Q1/686
- 本发明属于生物分析技术领域，具体为一种同时分析氨氧化或甲烷氧化相关细菌群落结构的分析方法。本发明步骤为：设计能同时覆盖颗粒性甲烷氧化酶α亚基基因和氨氧化单加氧酶α亚基基因的高简并加tag引物；利用此引物对环境样品中提取的基因组DNA进PCR扩增；利用barcode标记的tag引物对纯化过的第一步PCR产物进行PCR扩增；对扩增序列进行测序，分析得到氨氧化或甲烷氧化相关细菌的群落结构特征。本方法的保真性经不同pmoA/amoA基因重组质粒混合实验的验证，故本方法能够在显著提高引物覆盖度的前提下提高PCR扩增效果，并真实反映环境样品中不同类群的分布，使得环境样品中氨氧化或甲烷氧化细菌群落结构分析更加完整。本方法也可应用于其它功能微生物群落结构分析。
- 使用流动池检测分子的装置和方法-201780050919.3
- B·安德列耶夫;R·K·巴蒂亚;V·布里奥尼斯;P·曹;J·钦;B·希奥皮克;A·德拉泽尔达;乔纳森·海·洪;H·黄;C·凯利;S·罗伊;A·C·拉姆;G·C·洛尼;D·麦克希里;K·E·莫拉维;V·雷维拉;D·D·斯文森 - 易捷仪器诊断股份有限公司
- 2017-06-28 - 2019-10-11 - C12Q1/686
- 方法包括将含有靶扩增子的检测溶液运输进分子诊断试验装置的检测模块中。所述检测模块包括包含一系列捕获探针的检测表面，当运输所述检测溶液时，所述靶扩增子的第一部分结合所述捕获探针。然后将第一试剂运输进所述检测模块，所述第一试剂被配制成产生指示所述靶扩增子的存在的可视信号。当运输所述第一试剂时，所述第一试剂结合所述靶扩增子的第二部分。将第二试剂运输进所述检测模块。所述第二试剂包括沉淀底物，所述沉淀底物被配制成当所述第二试剂与所述第一试剂发生接触时产生不溶性有色产物而催化所述可视信号的产生。所述方法包括经由所述检测模块的透明部分观察所述可视信号。
- 一种基于微流控技术获取单样本遗传信息的方法-201910541379.X
- 董嘉;王雅琦;凌云峰;张华;李琛;刘宇 - 苏州锐讯生物科技有限公司
- 2019-06-21 - 2019-10-08 - C12Q1/686
- 本发明提供了一种基于微流控技术获取单样本遗传信息的方法，将油相试剂及三种水相试剂加到微流控芯片内；通过流控仪使油相试剂对混合的水相进行包裹，形成油包水微乳液滴；将获得的微乳液滴转至离心管中，进行裂解及逆转录反应；向反应的微液滴中加入破乳油，分离含微球的上清水相于另一离心管中；将含微球的上清水相与PCR反应体系以油相试剂包裹，形成含有PCR扩增体系的油包水微乳液滴；将获得的液滴进行PCR扩增反应。本发明基于微流控技术配合油包水封装体系，实现了将大量细胞或细菌或病毒的单个封装，依次进行逆转录、PCR扩增反应，获得单个细胞或细菌或病毒等各自独特的遗传信息，保证了有效信息的保留并使用。
- 聚合酶组合物、制得和使用其的方法-201480064864.8
- P·范德霍恩;D·梅热;T·尼基福罗夫;M·兰德斯;E·托泽 - 生命技术公司
- 2014-09-30 - 2019-09-27 - C12Q1/686
- 本发明提供适用于核酸聚合的组合物、方法、套组、系统以及设备。具体来说，提供允许核酸扩增的经修饰的聚合酶和其生物活性片段。在一些方面中，本发明提供与参考聚合酶相比系统误差更低的经修饰的聚合酶。在一个方面中，本发明涉及适用于核酸测序、基因分型、拷贝数变异分析、双端测序以及基因分析的其它形式的经修饰的聚合酶。在一些方面中，本发明涉及适用于产生核酸库或核酸模板的经修饰的聚合酶。在一些方面中，本发明涉及鉴别可以跨越聚合酶的类别或家族转移的同源氨基酸突变以提供具有改变的特性的新颖聚合酶。
- 一组FRET杂交扩增引物和检测探针组-201910597457.8
- 黄劭;张家剑;方健;宋方丽 - 黄劭
- 2019-07-04 - 2019-09-20 - C12Q1/686
- 本发明公开了一组FRET杂交扩增引物和检测探针组。包括正向引物、反向引物、荧光基团和荧光检测探针，所述的正向引物包括顺序相连的与模板互补的正向序列、自体杂交反向序列1和荧光探针序列的反向结合序列，所述的荧光检测探针包括顺序相连的荧光探针序列和其末端的荧光供体基团或荧光受体基团，所述的荧光基团上连有自体杂交序列2，所述的自体杂交反向序列1和自体杂交序列2都能与正、反向引物延伸得到的单链扩增产物自体杂交，并且杂交区域相邻，所述的荧光基团为荧光受体基团或荧光供体基团。本发明在使用扩增引物上引物的自身杂交区域与扩增产物直接杂交取代独立的FRET检测探针，其杂交效率明显提高，从而提高了检测灵敏度。
- 一种检测叶酸代谢关键酶基因多态性位点基因分型试剂盒和其检测方法-201610940238.1
- 熊乾斌 - 上海泽因生物科技有限公司
- 2016-11-01 - 2019-09-20 - C12Q1/686
- 本发明提供一种利用荧光标记探针结合多重PCR方法对叶酸代谢关键酶基因(MTHFR和MTRR)3个位点进行分型的方法。根据MTHFR和MTRR基因设计扩增引物和荧光探针，在PCR仪扩增中待测三段DNA序列，检测反应体系中的扩增和溶解过程中释放的荧光信号，结果判读通过：(1)根据野生型和突变型标准质粒的杂交峰所显示的Tm值为来判断分型结果；(2)同时又可以通过扩增曲线的荧光值高低分型。本发明使用的引物和探针特异性强，灵敏度高；三个位点的检测同时进行，操作简单，结果容易判读；两次校准的分型方式使得分型结果更加准确可靠。本发明所述方法可在指导孕妇口服补充叶酸、提示脑卒中、冠心病和静脉血栓的高风险性以及叶酸代谢活性评估等方面进行应用。
- 一种常温稳定的PCR预混液-201610321072.5
- 疏义林;张守德 - 安陆市疾病预防控制中心
- 2016-05-16 - 2019-09-20 - C12Q1/686
- 本发明属于生物技术领域，涉及PCR实验，具体地，本发明提供了一种PCR预混液，包括Taq酶、缓冲液、dNTP以及甘油、叠氮化钠和1，2，4‑三氮唑等。本发明的PCR预混液能够在常温下稳定存在144小时以上，提高工作效率，节省成本。
- 一种猪源产气荚膜梭菌致病性试验方法-201910557213.7
- 郝海红;袁宗辉;罗讯;徐紫慧;黄玲利;王玉莲;彭大鹏;王旭;陈冬梅;陶燕飞;潘源虎;谢书宇;程古月;瞿玮;刘振利;谢长清;房诗薇;黄啸 - 华中农业大学
- 2019-06-25 - 2019-09-17 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种猪源产气荚膜梭菌致病性试验方法，属于生物技术领域。所述方法包括攻毒菌株的增菌传代培养，试验动物的攻毒和观察以及细菌的分离与鉴定三部分。其中细菌增菌培养基选择液体硫乙醇酸盐培养基(FT)，传代培养基选择强化布氏血琼脂培养基，可有效增加细菌攻毒菌数量并且缩短细菌培养时间。攻毒方式为攻毒菌液腹腔注射法，攻毒8h后即观察到动物的发病和死亡现象。解剖发病及死亡动物病变组织，接种于选择性培养基胰胨‑亚硫酸盐‑环丝氨酸琼脂基础(TSC)进行分离培养，挑取菌落形态明确的单菌落，接种于FT中进行增菌培养，使用多重PCR方法鉴定分离细菌。所述方法简单且成本低，试验方法可行，试验结果准确可靠。
- 一种鲷鱼种质鉴定的方法及其应用-201610962097.3
- 李建林;徐跑;张志勇;俞菊华;李红霞;唐永凯;张志伟;于凡 - 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心;江苏省海洋水产研究所
- 2016-11-04 - 2019-09-13 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种鲷鱼种质鉴定的方法及其应用，先后采用两对特异性引物进行扩增，并结合酶切的方法鉴别真鲷、黑鲷及二者的正反交后代。本发明所述方法能够在分子水平快速、准确的鉴定鲷鱼的种质；且能够清楚鉴别真鲷、黑鲷及二者正反交后代，为鲷鱼的品种鉴定、种质资源保护和育种等提供重要依据。
- 重叠扩增子的选择性扩增-201680014257.X
- 王朝晖;宋钢 - 真固生物科技有限公司
- 2016-03-01 - 2019-09-13 - C12Q1/686
- 本发明涉及一种可扩展的多重PCR方法，可以同时扩增重叠扩增子而没有常规多重PCR的缺点。该方法选择性地扩增具有重叠区域的靶核酸片段。该方法包括步骤：获得包括第一标签t2和第一正向引物F1的第一核酸序列，获得包括第二标签t1和第一反向引物R1的第二核酸序列，获得包括第二标签t1和第二正向引物F2的第三核酸序列，获得包括第三标签t3和第二反向引物R2的第四核酸序列，其中每一个引物都是基因特异性引物；执行PCR的初始循环；以及接下来在更高的退火温度下执行PCR随后的循环，以获得扩增产物。
- 基于金属钌配合物的PCR荧光目视比色检测方法及试剂盒-201910512615.5
- 徐秦峰;李昕;澹台玮;郑蓉 - 陕西科技大学
- 2019-06-13 - 2019-09-10 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种基于金属钌配合物的PCR荧光目视比色检测方法及试剂盒。以金属钌配合物作为荧光染料进行PCR反应的闭管目视比色检测，结果显示，在PCR反应扩增的目标DNA存在的情况下扩增体系显示红色，不存在则无色，并且与SYBR Green I和EvaGreen相比，金属钌配合物作为荧光染料可以产生更加明显的颜色对比，使PCR的检测具有直观、省时、便捷、低成本的优点。
- PCR油相组合物及其制备方法-201910517591.2
- 胡佳 - 苏州叠代生物科技有限公司
- 2019-06-14 - 2019-09-10 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种PCR油相组合物，包括以下体积份组分：氟化油、矿物油、聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂、聚乙二醇、D‑海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯。具有静置稳定性和热循环稳定性良好的有益效果。公开了一种PCR油相组合物的制备方法，包括：将氟化油和矿物油混合均匀；加入聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂混合均匀，得第一混合液；将聚乙二醇、D‑海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯混合均匀，加入至第一混合液中混合均匀，然后冷却，超声处理，冷却，超声处理，冷冻，超声处理，制备的油相组合物的耐热变化性能良好。
- 一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法-201810543423.6
- 陈金慧;龙晓飞;施季森;成铁龙;肖保荣;刘思芹;翁禹豪;胡凌峰;刘阳 - 南京林业大学
- 2018-05-29 - 2019-09-10 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种杂交鹅掌楸亲缘关系的鉴定方法及其专用试剂盒，该方法包括：1)提取杂交鹅掌楸叶片DNA；2)进行PCR检测；3)用引物18.2能特异性扩增出400bp的产物的母本为中国鹅掌楸，能特异性扩增出382bp的产物母本为北美鹅掌楸，再用引物700对中国鹅掌楸的进行PCR扩增，能特异性扩增出700bp产物的母本为中国鹅掌楸西部种源，能特异扩增出242bp产物的母本则为中国鹅掌楸东部种源；对北美鹅掌楸的用引物700进行PCR扩增，均特异获得700bp的产物。本发明可对幼苗阶段的杂交鹅掌楸天然林进行有效鉴定，具有速度快，效率高，结果准确，重复性与稳定性好等优点。
- DNA扩增产物快速检测方法-201611127376.4
- 梁兴国;王鹏飞;安然 - 青岛千卓分子生物科技有限公司
- 2016-12-09 - 2019-09-06 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种DNA扩增产物快速检测方法，通过在目的DNA上下游引物的5’端分别添加不同的Tag序列，并使用带有两个羟甲基的芳香族化合物对引物与Tag之间的区段进行修饰，使其PCR扩增产物带有末端单链标签Tag。分别设计与上下游引物Tag互补的序列，并将该互补序列分别结合到胶体金粒子上，制成标记胶体金溶液。将PCR扩增产物与标记胶体金溶液混合，通过肉眼便可判断检测结果，无需其他仪器设备，大大节约检测成本，且具有很高的检测灵敏度和广泛的通用性。
- 一种基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法-201910485738.4
- 黄拔严;张彦伟 - 北京益序医疗科技有限公司
- 2019-06-05 - 2019-08-30 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法，包括步骤一，模板的制备；步骤二，引物的合成与准备；步骤三，结果的判定；模板的制备包括以下步骤：用清水漱口后，采集口腔脱落细胞，采集时将口腔脱落细胞采集拭子伸进口腔壁，紧靠脸颊内侧上下刮拭30～40次；用1mL TE将细胞涮洗下来，进行离心分层；弃上清，沉淀用50μL TE重悬，即可作为模板；准备PCR引物序列：设定PCR体系和PCR程序根据熔解曲线的峰型判定基因型；该基于熔解曲线分析的GSTM1基因缺失检测方法，采用单步分析方法，细胞采集后直接进行分析，无需核酸提取，步骤简单，且对照与目标基因的分析单管内就可以实现，减少实验步骤及成本，且荧光通道只要一个，对设备要求低。
- 基于高分辨熔解曲线形状的多重PCR检测方法及试剂盒-201910574965.4
- 徐秦峰;马西亚;贺晓玲 - 陕西科技大学
- 2019-06-28 - 2019-08-30 - C12Q1/686
- 本发明公开了一种基于高分辨熔解曲线形状的多重PCR检测方法及试剂盒。本发明采用PCR饱和荧光染料，扩增完成后直接进行高分辨熔解，对采集的熔解曲线进行归一化、差异化或主成分分析，即可实现单管有效同时检测多个靶序列的目的。根据高分辨熔解曲线形状信息而非熔解温度来进行鉴别检测，显著降低了多重PCR分析引物的设计难度，使得具有微小Tm差异的多个PCR扩增产物能够同时检测；避免了开管操作造成目的DNA被污染的可能性，弥补了多色荧光标记或者空间分隔平行下的单重扩增反应成本较高的缺陷，提高了检测通量，降低了检测成本，具有较强的实际应用价值。
- 一种人类红细胞血型系统ABO抗原的多重PCR-SBT基因分型方法及试剂-201811609618.2
- 朱发明;应燕玲;洪小珍;何吉;许先国;陈舒;马开荣 - 浙江省血液中心
- 2018-12-27 - 2019-08-30 - C12Q1/686
- 本发明属于基因分型检测方法技术领域，具体涉及一种用于人类红细胞血型系统ABO抗原的多重PCR‑SBT基因分型方法。本发明还涉及一种人类红细胞血型系统ABO抗原基因分型的多重PCR‑SBT试剂。本发明所提供的试剂和方法可作为一种独立的、应用广泛的鉴定方法，解决了ABO抗原系统快速准确定型的问题，发挥多重PCR‑SBT对ABO基因定型操作高通量、结果准确的特点，在临床输血医学研究和遗传学等领域的相关应用将受到高度重视，对于医学研究单位、药学研究和试剂开发单位具有重要的现实意义。
- 用于低浓度核酸样品的测量方法-201810364807.1
- 味正唯;黄章维;邱创汎 - 奎克生技光电股份有限公司
- 2018-04-23 - 2019-08-27 - C12Q1/686
- 本发明提供一种用于低浓度核酸样品的测量方法。所述测量方法是一种对qPCR实验中待测样品处于低浓度核酸范围的核酸定量方法，本方法通过修正原始Cq值以延伸实验检测的线性动态范围并增加检测灵敏度。所述方法包括以下步骤，提供具有多个反应孔的测试载具，以对核酸样品进行qPCR反应，接着根据以阳性反应孔的数目所得到的阳性孔量测值进行调整步骤，以修正所述qPCR反应Cq值至预期的线性范围表现值。
- 一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法和检测试剂盒-201910229082.X
- 王文忠;张为;田军龙;胡军;陈更新 - 为康（苏州）基因科技有限公司
- 2019-03-25 - 2019-08-27 - C12Q1/686
- 本发明提供了一种人类血小板同种抗原基因分型的检测方法，其特征在于，通过设计出特异性引物再利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段，设计出单碱基延伸引物后进行单碱基延伸后，通过质谱分析精确测量目标DNA序列。可一次性检测血小板同种抗原HPA‑1～21bw等位基因。然后直接打质谱，直接出数据。整个过程封闭，时间短，成本低。通过对患者和供血者血小板同种抗原基因分型检测，可以找到配型成功的血小板，有效避免免疫因素引起的血小板输注无效的问题。本产品成本低，更准确，有望作为一种临床常规检测手段，替代血清学的检测方法。
- 一种食源性致病菌单增李斯特菌PCDR法检测试剂-201910444774.6
- 孙新城;白艳红;张靖楠;张勇;景建洲;胡金强;赵电波;高辉;耿尧;张华;侯佩 - 郑州轻工业学院
- 2019-05-27 - 2019-08-27 - C12Q1/686
- 本发明涉及食源性致病菌单增李斯特菌PCDR法检测试剂，可有效解决高灵敏度PCDR法快速、准确检测食源性致病菌单增李斯特菌的问题，方法是，由以下组分：SD缓冲液、dNTPs、Mg2+、1对上、下游内引物、1对上、下游外引物，SD DNA聚合酶，加超纯水混匀制成；使用时：将单增李斯特菌的基因组DNA溶解在ddH2O中，取DNA和本发明检测试剂混合在一起，在EP管中混匀；将反应管放置于PCR仪中反应、预变性、退火、延伸，循环，再琼脂糖凝胶电泳检测，即可实现PCDR法对食源性致病菌单增李斯特菌的检测。本发明组分科学合理，易生产制备，使用方便，能够快速、灵敏、特异性检测食源性致病菌单增李斯特菌，确保食品安全，有显著的经济和社会效益。
- 专利分类
