[发明专利]一种提高铅DNAzyme稳定性的固定化酶方法及应用

摘要

本发明属于环境监测技术领域，提供一种提高铅DNAzyme稳定性的固定化酶方法及应用。在常温常压下，利用仿生矿化的方法，在水相中合成沸石咪唑酯骨架‑8固定化的生物复合材料。相对于游离的DNAzyme来说，ZIF‑8保护层增加了DNAzyme对抗极端环境的能力，如DNA水解酶，扩展了铅DNAzyme的检测领域。建立了基于DNAzyme@ZIF‑8生物复合材料的荧光传感方法，实现了铅离子的灵敏检测。

主权项

1.一种提高铅DNAzyme稳定性的固定化酶方法，其特征在于，步骤如下：(1)制备铅DNAzyme：将序列1 FAM标记的铅DNAzyme底物链及等量序列2 BHQ1标记的铅DNAzyme酶链在25‑35℃下混合均匀后，放入水浴锅中，加热至95℃，保持5‑10min后自然冷却至室温，形成部分杂交的双链铅DNAzyme；(2)制备沸石咪唑酯骨架‑8固定化铅DNAzyme：DNAzyme与2‑甲基咪唑在水中充分搅拌混合，形成混合液A；Zn(NO₃)₂溶于水中形成溶液B；之后，将溶液B缓慢倒入混合液A中，得到的混合液在室温下搅拌12‑24h；其中Zn(NO₃)₂和2‑甲基咪唑的摩尔比为1:35‑1:140；依次用高纯水和乙醇将得到的混合物离心清洗3‑5次后冷冻干燥12‑24h得到粉末状物质DNAzyme@ZIF‑8，将其研磨并置于‑4～‑20℃的条件下冷冻保存；所述的序列1：5’‑FAM‑CTCACTAT/rA/GGAAGAGATGATGTCTGT‑3’；所述的序列2：5’‑ACAGACATCATCTCTGAAGTAGCGCCGCCGTATAGTGAG‑BHQ1‑3’。