[发明专利]一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA-21方法在审
| 申请号： | 201910509267.6 | 申请日： | 2019-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN110241181A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 余伯阳;田蒋为;黄浠桐 | 申请（专利权）人： | 中国药科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/682 | 分类号： | C12Q1/682 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 柏尚春 |
| 地址： | 211198 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA‑21方法，该方法在磁珠上偶联底物链和被锁定链沉默的脱氧核酶链，当靶标miRNA出现后与锁定链杂交结合，将其从脱氧核酶链上竞争下来，从而激活脱氧核酶切割底物链；释放的蔗糖酶将蔗糖水解为葡萄糖，通过血糖仪检测获得输出信号。本发明通过引入脱氧核酶和蔗糖酶对miRNA的检测信号进行双酶放大作用，提高了检测灵敏度，在100‑1000fM具有线性关系，检测限为68.08fM，具有简便、快捷、灵敏、高效、成本低等有点。 | ||
| 搜索关键词： | 脱氧核酶 蔗糖酶 血糖仪 检测 锁定 检测灵敏度 葡萄糖 放大作用 检测信号 切割底物 输出信号 线性关系 蔗糖水解 底物链 链杂交 靶标 磁珠 偶联 灵敏 激活 释放 引入 | ||
【主权项】：
1.一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA‑21方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)制备检测探针：以链霉亲和素修饰磁珠为载体连接脱氧核酶链(SEQ ID NO.1)、底物链(SEQ ID NO.2)‑蔗糖酶复合物形成检测探针；所述脱氧核酶链被锁定链沉默，其结构为5’‑生物素‑自由链片段1‑锁定链(SEQ ID NO.3)‑臂2‑催化核心序列‑臂1‑3’；所述底物链与生物素偶联，其结构为5’‑生物素‑自由链片段2‑片段1‑RNA(rA)‑片段2‑巯基‑3’；所述自由链片段1的序列为：5’‑(t)60‑3’；所述自由链片段2的序列为：5’‑(t)20‑3’；所述臂1的序列为：5’‑atagt‑3’；所述臂2的序列为：5’‑tctcttc‑3’；所述片段1的序列为：5’‑actat‑3’；所述片段2的序列为：5’‑gaagaga‑3’；所述催化核心序列的序列为：5’‑tccgagccggtcgaa‑3’；所述RNA(rA)为RNA的作用位点；(2)向含有Mn2+离子的溶液中加入待测miRNA‑21(SEQ ID NO.4)样品和所述检测探针，待测miRNA‑21与检测探针的锁定链结合区域特异性结合，将锁定链竞争下来，启动脱氧核酶链切割底物链的RNA作用位点(RNA(rA))；(3)加入EDTA终止反应；(4)反应终止后进行磁分离，转移上清液至蔗糖的溶液中，静置反应；(5)利用血糖仪检测产生的葡萄糖信号，获得葡萄糖浓度值，根据miRNA‑21与葡萄糖浓度的线性关系，计算miRNA‑21的浓度值。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国药科大学，未经中国药科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910509267.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 一种microRNA检测试剂盒和多生物素分子检测microRNA的方法-201910767806.6
- 李先强;姜昕 - 武汉中帜生物科技股份有限公司
- 2013-07-30 - 2019-11-12 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种microRNA检测试剂盒和多生物素分子检测microRNA的方法。本发明将待测microRNA分子与放大桥分子、捕获桥分子一起加入到固相上进行杂交，通过捕获桥分子分别与microRNA分子和捕获分子的部分杂交，将microRNA分子捕获到固相上，而放大桥分子的一端与靶分子杂交识别，另一端与下一步加入的放大分子结合，放大分子上连接的多个生物素分子再与标记物如辣根过氧化物酶结合，最终实现microRNA分子的检测过程。本发明方法十分灵敏，而且是通过信号放大而不是基于PCR的模板扩增技术来实现对核酸的检测，从而避免PCR固有的污染问题。
- 一种检测miRNA-122的电化学生物传感器-201711324299.6
- 黄加栋;裴倩倩;王玉;刘素 - 济南大学
- 2017-12-13 - 2019-11-08 - C12Q1/682
- 本发明提供了一种检测miRNA‑122的电化学生物传感器，包括HAP1（发卡探针1）、ExoIII酶（核酸外切酶III）、金电极和修饰于金电极表面的HAP2（发卡探针2）‑辅助探针。本电化学生物传感器特异性好、灵敏度高；反应条件温和，反应速度快，使用金电极简便、小型化、易携带、可多次使用；制备方法简单，性能稳定，电极的重复性好，适用于人体组织中miRNA‑122的检测和生物传感器产业化的实际应用。
- 单管型多重微生物检测体系及其即时检测方法-201910681284.8
- 吴匡培 - 宁儿医院股份有限公司
- 2019-07-26 - 2019-11-05 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种单管型多重微生物检测体系及其即时检测方法，所述单管型多重微生物检测体系包括至少1种信号转换序列模板、1种信号扩增序列模板、DNA聚合酶、切刻内切酶、缓冲溶液、DNA解旋酶和/或随机六引物以及指示剂。本发明通过DNA解旋酶和/或随机六引物将待检测的标本中的病原微生物(DNA或RNA)转换成单链DNA，使单链DNA与信号转换序列模板互补结合，在切刻内切酶及DNA聚合酶的作用下生成信号分子DNA单链，信号分子DNA单链在信号扩增序列模板、切刻内切酶及DNA聚合酶的作用下不断扩增信号，通过指示剂的作用表征检测体系的颜色变化，即可检测出是否具备病原微生物，通过进一步的筛查即可检测出待检测标本对应的病原微生物的种类。
- 一种miRNA-21的检测方法-201910653576.0
- 余伯阳;田蒋为;黄浠桐 - 中国药科大学
- 2019-07-18 - 2019-10-29 - C12Q1/682
- 本发明公开了一种miRNA‑21的检测方法，该方法在磁珠上偶联底物链‑蔗糖酶复合物，当靶标miRNA出现后与底物链杂交，双链特异性核酸酶能选择性地裂解在DNA/RNA双链中的DNA并保持RNA的活性，释放的miRNA进行下一轮杂交循环；最后上清液中的蔗糖酶将蔗糖水解为葡萄糖，通过血糖仪检测获得输出信号。本发明通过引入双链特异性核酸酶和蔗糖酶对miRNA的检测信号进行双酶放大作用，提高了检测灵敏度，在10‑200pM具有线性关系，检测限为1.8pM，具有简便、快捷、灵敏、高效等优点。
- 基于协同的掩蔽效应和结合保护效应介导的级联信号放大策略检测转录因子的方法-201610579267.X
- 姜玮;王磊;朱德颂 - 山东大学
- 2016-07-21 - 2019-10-29 - C12Q1/682
- 本发明公开了一种基于协同的掩蔽效应和结合保护效应介导的级联信号放大策略检测转录因子的方法。本发明通过将掩蔽效应应用于生物传感，设计DNA掩蔽单链，与过量识别探针杂交为稳定双链，消除了过量识别探针去除不完全而导致的假阳性信号，同时结合目标物的结合保护效应，触发级联的信号放大，包括SDA和ERCA，实现对转录因子及实际样品的高灵敏检测。
- 一种赭曲霉素A的检测方法及检测试剂盒-201710133415.X
- 陈俊华;李定强;陈曼佳 - 广东省生态环境技术研究所
- 2017-03-08 - 2019-10-18 - C12Q1/682
- 本发明公开一种赭曲霉素A的检测方法及检测试剂盒。本发明以赭曲霉素A的核酸适体为分子识别元件，如果待检测体系中含有赭曲霉素A时，通过赭曲霉素A的激活，形成具有催化功能的核酸，可不断循环切割底物序列，达到信号放大的目的。结合胶体金颜色变化，可实现肉眼直接观察来检测赭曲霉素A。本发明具有较高的灵敏度，对赭曲霉素A的检测限为10 pg/mL，检测具有很好的特异性，常见干扰物对检测不产生影响。本发明以胶体金为信号报告分子，检测结果直接肉眼可见，无需使用任何检测仪器，操作简单，成本低廉，适于大范围应用于基层筛查赭曲霉素A污染情况。
- 一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法-201910642274.3
- 徐艳;陈玮嘉;张兆坤;朱君;王萍 - 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
- 2019-07-16 - 2019-09-24 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种基于端粒酶扩增的miRNAs检测方法，包括链霉亲和素修饰磁珠连接生物素修饰的探针、探针与靶标miRNAs结合、端粒酶扩增和检测。本发明设计发夹结构探针，以识别靶标miRNAs后露出的引起序列，诱发端粒酶扩增进一步放大信号，并通过磁分离进行miRNAs可视化检测。分离方法便捷，所用材料部分已商品化，生物安全性高。检测过程不需借助专业仪器，反应仅需水浴锅进行，适应基层医疗检测需求。本发明成本低廉、检测灵敏、特异性高且可视化。
- 一种基于核酸适体和端粒酶扩增的凝血酶检测方法-201910642273.9
- 徐艳;张兆坤;陈玮嘉;朱君;王萍 - 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
- 2019-07-16 - 2019-09-20 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种基于核酸适体和端粒酶扩增的凝血酶检测方法，以凝血酶为靶标，采用核酸适体识别靶标，并利用端粒酶扩增的方式进一步放大信号，同时结合磁分离的手段，实现凝血酶的可视化检测。该方法控制反应条件，在磁珠表面修饰识别凝血酶的探针，探针包括凝血酶核酸适体序列及端粒酶识别序列，探针与靶标结合后，暴露探针末端端粒酶识别序列。本发明以核酸适配体识别靶标，结合端粒酶扩增进一步放大信号，通过磁分离进行凝血酶可视化检测。分离方法便捷，所用材料部分已商品化，生物安全性高。本发明具有反应简单、成本低廉、检测灵敏可视化的特点。
- 一种基于dsDNA-SYBR Green I光敏催化的化学发光传感方法-201910484799.9
- 张信凤;范晓娅;邓莉;李琳 - 成都理工大学
- 2019-06-05 - 2019-09-17 - C12Q1/682
- 一种基于dsDNA‑SYBR Green I光敏催化的化学发光传感方法，主要将dsDNA‑SYBR Green I光敏产生的短寿命、强氧化能力的单线态氧的氧化能力用K4Fe(CN)6进行储存，将其氧化成K3[Fe(CN)6]。通过该简单的储存步骤，可使光敏氧化鲁米诺化学发光的强度提高约30倍，从而显著地提高检测DNA的灵敏度，对BRCA1、BRCA2、p53基因的检出限分别可达3 pM、6pM和5pM。而且，该法操作简便，无需分离、标记等步骤，并可拓展至其它任意序列DNA的检测，具有良好的应用前景。
- 一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA-21方法-201910509267.6
- 余伯阳;田蒋为;黄浠桐 - 中国药科大学
- 2019-06-12 - 2019-09-17 - C12Q1/682
- 本发明公开了一种基于脱氧核酶和蔗糖酶的血糖仪检测miRNA‑21方法，该方法在磁珠上偶联底物链和被锁定链沉默的脱氧核酶链，当靶标miRNA出现后与锁定链杂交结合，将其从脱氧核酶链上竞争下来，从而激活脱氧核酶切割底物链；释放的蔗糖酶将蔗糖水解为葡萄糖，通过血糖仪检测获得输出信号。本发明通过引入脱氧核酶和蔗糖酶对miRNA的检测信号进行双酶放大作用，提高了检测灵敏度，在100‑1000fM具有线性关系，检测限为68.08fM，具有简便、快捷、灵敏、高效、成本低等有点。
- 多重信号放大-201880006249.X
- J·Y·基希;B·贝利沃;尹鹏;王瑜;S·K·萨卡 - 哈佛学院院长及董事
- 2018-01-09 - 2019-08-23 - C12Q1/682
- 在一些实施方案中，本文提供了用于通过发夹介导的多连体化进行高度地多重原位信号放大的方法和组合物。
- 基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统-201910198957.4
- 唐波;李璐;范媛媛;盛仁杰 - 山东师范大学
- 2019-03-15 - 2019-07-09 - C12Q1/682
- 本发明提供一种基于液滴微流控技术的单细胞内miRNA高灵敏多组分同时检测方法和系统，属于生物检测和分子生物学技术领域。与现有技术相比，本发明具有高效的细胞处理能力，能够捕获100个细胞/秒，检测13000个细胞/小时。液滴内的二次等温放大提高了扩增反应速率和检测灵敏度，使得能够分析单个细胞内多种表达下调的miRNA。液滴内的隔离空间能有效地防止miRNA的降解，保证检测的精确度，具有良好的实际应用之价值。
- 一种用于平行测定尿嘧啶-DNA糖基化酶和内切酶IV活性的方法及其应用和试剂盒-201510961280.7
- 姜玮;王磊;吴玉姝 - 山东大学
- 2015-12-18 - 2019-07-09 - C12Q1/682
- 本发明提供了一种用于平行测定尿嘧啶‑DNA糖基化酶和内切酶IV活性的方法及其应用和试剂盒。当目标物为UDG时，若UDG存在，所述发夹探针中的U碱基被移除，产生一个AP位点，产生的AP位点被工具酶EndoIV切刻，释放出含自由3’末端的引物序列用于引发随后的滚环放大反应RCA；若UDG不存在时，3’末端被封闭在所述发夹探针，RCA过程不能进行；当目标物为EndoIV时，若EndoIV存在，其RCA过程与上述UDG活性检测中的RCA过程是一样的，若EndoIV不存在时，3’末端被封闭在所述发夹探针，RCA过程不能进行。其既能用作UDG的识别探针又能用作EndoIV的前体识别探针，因此简化了探针的设计。UDG和EndoIV的检测限分别低至0.00017U/mL和0.11U/mL，结果比其他免标记荧光方法更好或相当。
- 靶标检测和信号放大-201380042575.3
- 西蒙·马克·伯恩;艾莉森·威尔彦·托德;蒂莫西·丹尼尔·米罕 - 斯比戴克斯私人有限公司
- 2013-06-18 - 2019-06-04 - C12Q1/682
- 本发明涉及用于检测靶标分子以及放大通过检测测定产生的可检测信号的组合物和方法。更具体来说，本发明涉及利用催化核酸酶来产生和/或放大指示存在靶标分子(例如核酸和蛋白质)的信号的方法以及用于所述方法中的组合物。
- 一种基于核酸外切酶和核酸探针的电化学检测特定单链DNA浓度的方法-201610276057.3
- 周楠迪;王淑玲;田亚平;孙笑凡 - 江南大学
- 2016-04-29 - 2019-04-16 - C12Q1/682
- 一种基于核酸外切酶和核酸探针的电化学检测特定单链DNA浓度的方法，属于分析化学技术领域。本发明设计合成了两种发夹型探针P1和P2。首先，用1,6‑己二硫醇HDT将金纳米颗粒修饰金电极，制备AuNPs‑HDT‑Au电极，然后将P1探针修饰到电极上。以特定单链目标DNA作待检测物，在没有目标DNA存在时，P1和P2探针能够共存；在目标DNA、P2探针和核酸外切酶Exo
存在时，目标DNA能触发两个独立的反应循环。最后在血红素存在时，保留在电极表面的P1探针的G‑四链体序列和血红素相互作用，产生强烈的电信号，用差分脉冲伏安法对目标DNA进行检测，峰电流信号与目标DNA浓度之间在一定浓度范围内呈相关性，实现对目标DNA浓度的检测。本发明方法具有灵敏度高、特异性强的优点。
- 使用DNA纳米技术的单分子检测或定量-201780049976.X
- 海因里希·格拉布迈尔;约翰内斯·贝内迪克特·韦尔施泰因 - 慕尼黑路德维希马克西米利安斯大学
- 2017-06-14 - 2019-04-02 - C12Q1/682
- 本发明涉及用于检测靶结构的方法和DNA纳米结构。特别地，本发明涉及DNA纳米结构，其通过巧妙地选择DNA纳米结构的形状和与该DNA纳米结构附连的标记物分子的位置，确保对标记物分子数量和测量信号的优选线性依赖，而不管多个这种DNA纳米结构的物理布置。本发明还涉及在优选以同时的方式使用多重方法的定量多种靶分子的方法中，所述DNA纳米结构和其他纳米报告子优选与特异性结合靶分子的接头组合的用途。
- 一种microRNA的核酸信号放大器及其应用-201811551449.1
- 张志昆;刘晴晴;齐然;叶晓洁;刘玉敏 - 河北科技大学
- 2018-12-19 - 2019-03-08 - C12Q1/682
- 本发明公布了一种microRNA的核酸信号放大器及其应用，涉及到生命分析化学技术领域。该方法主要有3步：电极修饰、microRNA识别和信号放大。首先利用含巯基的捕获探针ssDNA修饰金电极，然后，探针ssDNA特异性识别靶标分子microRNA，最后，靶标microRNA触发发卡结构DNA，引发核酸自组装反应，实现信号的放大。本方法较传统分析方法具有更高的灵敏度和特异性，操作简单和快速。
- 基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP53检测方法-201811055080.5
- 杨大威;缪鹏;陈锡峰;孟凡渝 - 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所
- 2018-09-11 - 2019-02-26 - C12Q1/682
- 本发明公开了基于核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略的TP 53检测方法，包括以下步骤：1)制备含金纳米颗粒的金胶；2)用DNA探针修饰金纳米颗粒；3)将颈环DNA、TP 53混合于缓冲液，加入核酸外切酶III，制得反应溶液；4)DNA探针修饰的金胶溶液混合，并加入氯化锌继续反应；5)进行荧光信号的测量。本发明通过核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略，将待测物质TP 53浓度的检测限大大降低。本发明用于检测TP 53具有灵敏度高、快速、成本低的特点，检测限为21fM，通过设计的核酸外切酶III以及核酶双重信号放大策略和荧光光谱技术的结合，可以实现TP 53生物传感的应用。
- 一种基于生物条形码的microRNA-7a电化学检测方法及应用-201811225478.9
- 朱文远;梁晓琳;周琳莹;李丹;温其霖;潘宏程 - 桂林理工大学
- 2018-10-20 - 2019-02-01 - C12Q1/682
- 本发明公开了一种基于生物条形码的microRNA‑7a电化学检测方法及应用。首先利用磁珠标记链霉亲和素修饰的捕获探针形成MB‑CP1结构，金纳米标记巯基修饰的信号探针和条形码形成Au‑RP1‑barcode结构。在目标物的存在下，MB‑CP1,Au‑RP1分别与目标物两端互补，形成“三明治”结构，利用二硫苏糖醇释放金纳米上面的条形码。生物传感器由连接在金电极上亚甲基蓝修饰的信号探针RP2与捕获探针CP2杂交组成，加入释放的条形码与捕获探针杂交，信号探针中修饰亚甲基蓝的一端与金电极接近，产生了信号电流，从而间接定量检测了目标物。本发明选择性好、灵敏度高、在癌症标记物的检测中有着重要的应用价值。
- 鉴别EB病毒感染淋巴细胞亚群及被感染细胞占该亚群细胞比例的方法及其应用-201811104244.9
- 卓频 - 北京倍科为生物技术有限公司
- 2018-09-20 - 2019-01-04 - C12Q1/682
- 本发明提供了一种鉴别EB病毒感染淋巴细胞亚群及被感染细胞占该亚群细胞比例的方法及其应用，涉及医学检测技术领域，本发明通过将探针与预处理后的外周血提取的单个核细胞混合，杂交后采用流式细胞计量术采集和分析，能够鉴别EB病毒感染淋巴细胞亚群及被感染细胞占该亚群细胞比例。通过该方法不仅可以准确找出EBV感染的细胞类型，还可以找出EBV感染细胞占该群细胞的比例，有助于临床针对EBV感染的细胞类型和占比制定针对性的治疗方案，对EBV感染造成的疾病进行高效、准确的治疗，对实施正确的治疗，提高患者的预后有重要作用。
- 一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒及检测方法-201810915667.2
- 叶泰;徐斐;彭艳;袁敏;曹慧;于劲松 - 上海理工大学
- 2018-08-13 - 2018-12-28 - C12Q1/682
- 本发明提供了一种基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大检测试剂盒，包括下列核酸序列：序列H1：5’端为a区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有b*区；序列H2：5’端为b区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有c*区；序列H3：5’端为c区，中间为茎环结构，其中茎环结构的茎结构中靠近3’端的一侧包含有a*区；其中目标核酸序列3’端为a*区，a与a*、b与b*、c与c*互补配对。还提供了采用上述的试剂盒检测基于Y型DNA模板荧光铜纳米簇的核酸信号放大方法。本发明的方法无需进行核酸修饰即可产生荧光信号，并且基于无酶信号放大策略，反应条件温和。
- 检测单个细胞中的核酸和鉴定异质大细胞群中罕见细胞的方法-201510070726.7
- 罗宇龄;陈世平 - 领先细胞医疗诊断有限公司
- 2006-06-19 - 2018-11-13 - C12Q1/682
- 本发明提供了通过核酸间接捕获标记来检测单个细胞中多种靶核酸的方法。也提供通过按参比核酸水平标准化来检测靶核酸相对水平的方法。描述了通过检测核酸来检测大的异质细胞群中单个细胞，特别是罕见细胞的方法。还提供相关的组合物、系统和试剂盒。
- 一种检测目标DNA或miRNA的方法-201810516888.2
- 樊春海;王丽华;葛志磊;左小磊;林美华 - 中国科学院上海应用物理研究所
- 2018-05-25 - 2018-10-19 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种检测DNA的方法，包括以下步骤：S1，提供带有识别序列的DNA四面体探针，形成带有DNA四面体探针的工作电极；S2，将目标DNA与S1中工作电极进行杂交形成带有引发序列的工作电极；S3，将DNA信号探针与S2中引发序列杂交形成带有生物素的工作电极；S4，将带有生物素的工作电极和亲和素修饰的辣根过氧化物酶反应形成带有第一复合体的工作电极；S5，将S4中第一复合体与带有双氧水的3，3’，5，5’四甲基联苯胺水溶液反应输出电化学信号，对目标DNA的浓度进行表征。本发明还涉及一种检测RNA的方法与上述检测DNA的方法，区别在于步骤S2将mi RNA helper的一端与带有DNA四面体探针的工作电极进行杂交，中间与目标miRNA杂交。实现目标DNA或miRNA的高灵敏度检出。
- 利用琼脂糖凝胶电泳可视化检测多种miRNAs的方法-201810351048.5
- 董海峰;代文浩 - 北京科技大学
- 2018-04-18 - 2018-09-28 - C12Q1/682
- 本发明提供了一种利用琼脂糖凝胶电泳可视化检测多种miRNAs的方法，其包括（1）根据待检测的目标miRNAs的序列，设计相应的发夹检测探针和发夹辅助探针；（2）发夹检测探针和发夹辅助探针的预变性；（3）将反应体系中加入待测目标miRNAs；（4）将上述反应混合物静置反应；（5）用琼脂糖凝胶电泳进行检测分析。本发明无需对检测探针进行标记，也无需加入酶对信号进行放大，即可直接采用本发明的方法进行多种miRNAs的可视化检测，操作简单快速，而且大大降低了检测成本，有助于我们对miRNAs进行分析以及肿瘤相关生理和病理机制的理解，并最终为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。
- 一种检测癌症标志物微小核糖核酸的试剂盒-201410753668.3
- 张振;王晓蒙;张书圣 - 临沂大学
- 2014-12-11 - 2018-06-26 - C12Q1/682
- 本发明涉及一种可对癌症标志物MicroRNA及癌细胞内MicroRNA活性进行分析检测的纳米探针及其制备方法。纳米探针是一种新型的四螺旋DNA分子探针,它包含三个功能部分:负载特殊设计的目标物识别区域,引发循环放大反应的触发区域,聚合‑剪切放大反应的模板区域。将这种纳米探针引入到表面增强拉曼(SERS)分析检测技术中,发展了一种四螺旋分子探针‑SERS检测方法,可实现对microRNA的高灵敏度检测，结合适体识别技术，四螺旋分子探针‑SERS的检测方法具有很好的特异性，该方法简化了样品处理过程，选择性好，准确度高，是检测肿瘤细胞标志物microRNA及癌细胞内MicroRNA的理想方法。本检测方法和试剂盒可区分癌症细胞和正常细胞，具有操作简单、高灵敏性和高特异性检测癌症标志物microRNA的优点，因此该发明具有良好的应用前景。
- 多生物素信号放大方法-201611086876.8
- 祝健 - 宁波源溯生物科技有限公司
- 2016-11-28 - 2018-06-05 - C12Q1/682
- 一种多生物素信号放大方法，通过一多生物素分子的连接对待检测信号进行放大以提升核酸检测的灵敏度，该多生物素分子包括通过杂交识别连接物分子的单链核酸分子和用于生物素标记的载体分子。从而一个靶分子可以与连接分子、载体分子和多个生物素以及相应的标记物连接而使检测的信号得到放大。在靶分子的不同区域连接上多个连接物分子，可获得更大的放大效果。
- 一种基于杂交链式反应及DNAzyme信号放大荧光检测黄曲霉素B1的方法-201710948960.4
- 明晶晶;姜廷福;吕志华 - 中国海洋大学
- 2017-10-12 - 2018-04-24 - C12Q1/682
- 一种基于杂交链式反应及DNAzyme信号放大荧光检测黄曲霉素B1的方法，本发明涉及一种信号放大技术荧光光谱传感器的构建和应用。利用靶标黄曲霉素B1引发适体DNA构象产生变化，促使发夹探针组装形成长链重复DNAzyme单元，催化剪切分子灯标产生荧光信号的无酶法AFB1传感策略。依靠这种方法，检测限可以达到0.5 ng/mL，远远低于国标（10 ng/mL）。此外，我们在发霉的大米提取物中对黄曲霉素B1进行了检测，同样取得了满意的结果。
- 基于DNA纳米结构的17β‑雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒-201510283651.0
- 陈俊华;周顺桂 - 广东省生态环境与土壤研究所
- 2015-05-28 - 2018-04-17 - C12Q1/682
- 本发明公开了一种基于DNA纳米结构的17β‑雌二醇可视化检测方法及检测试剂盒。其工作原理为17b‑雌二醇与核酸适体相互作用，启动链置换反应，不断打开三组茎环DNA探针，形成DNA纳米结构，在该DNA纳米结构中的三条DNA臂末端形成具有催化活性的G四聚体。G四聚体与氯高铁血红素结合，从而形成具有类似HRP的催化活性，催化氧化TMB，产生蓝色底物，结果肉眼可见，17b‑雌二醇的浓度与蓝色深浅直接相关。本发明操作简单，可在室温下完成整个反应，具有较高的灵敏度，对17b‑雌二醇的检测限为100 fM，具有很好的特异性，检测结果直接肉眼可见，无需任何检测仪器，可用于17b‑雌二醇的实地现场快速检测。
- 一种用于CYP2C19*2检测的电化学传感器-201710803959.2
- 于超;张成丽;赵一璘 - 重庆医科大学
- 2017-09-06 - 2018-02-23 - C12Q1/682
- 本发明涉及氯吡格雷相关代谢基因——CYP2C19*2等位基因检测的电化学传感器的制备方法及应用，属于电化学检测技术领域。其特征在于首先合成得到c‑C60/CeO2复合材料，然后将铂纳米粒子还原在c‑C60/CeO2复合材料上，再使单链DNA信号探针与该复合材料混合，制得生物信号探针；然后通过AuNPs@Fe‑MOF，亲和素，层层自组装用于生物素化的DNA捕获探针的固定，从而制备了CYP2C19*2等位基因检测的电化学传感器，该传感器成功的用于CYP2C19*2基因发生单碱基突变的检测。本发明的优点在于灵敏度高，特异性强，检测迅速，方便。本发明为氯吡格雷相关代谢基因提供了新的检测方法及指导个体化治疗。
- 专利分类
