[发明专利]一种微生物传感器的构建方法及其应用方法在审
| 申请号： | 201910376520.5 | 申请日： | 2019-05-07 |
| 公开（公告）号： | CN110007072A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 吕雪飞;张静;邓玉林;陶慧;杨元展 | 申请（专利权）人： | 北京理工大学 |
| 主分类号： | G01N33/533 | 分类号： | G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京宣言律师事务所 11509 | 代理人： | 李知伦 |
| 地址： | 100044 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种微生物传感器的构建方法及应用方法，步骤一构建待测氨基酸缺陷型菌株；步骤二截取LuxI/LuxR循环放大线路所需目的基因片段连接，得到含有基于LuxI/LuxR系统的循环放大线路的质粒，将重组质粒转化到氨基酸缺陷型菌株中，使报告基因片段重复表达；步骤三将菌株培养至对数生长期，在培养基中饥饿培养。本发明利用循环放大待测氨基酸缺陷型菌株作为微生物传感器，以与蛋白质标志物具有高特异性和高亲和力结合的核酸适配体作为“桥梁”，将对蛋白标志物的检测转化为对待测氨基酸的检测，利用构建的微生物传感器实现了对大分子生物标志物的检测，并且结合循环放大系统作为信号放大手段，大大提高了定量检测的灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 微生物传感器 构建 氨基酸缺陷 菌株 放大 检测 蛋白质标志物 重组质粒转化 大分子生物 蛋白标志物 对数生长期 核酸适配体 报告基因 定量检测 放大系统 高亲和力 饥饿培养 菌株培养 目的基因 片段连接 片段重复 培养基 标志物 灵敏度 氨基酸 截取 质粒 应用 桥梁 转化 | ||
【主权项】：
1.一种微生物传感器的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一 构建待测氨基酸的缺陷型菌株；步骤二 构建以荧光蛋白基因为报告基因的质粒，截取LuxI/LuxR循环放大线路所需目的基因片段，连接构建，得到含有基于LuxI/LuxR系统的循环放大线路的质粒，将重组质粒转化到感受态的由步骤一中获得的菌株中，使报告基因片段重复表达，获得具有信号循环放大能力的微生物传感器；步骤三 将步骤二中获得的菌株培养至对数生长期，在培养基中饥饿培养，耗尽菌株中内源性的待测氨基酸分子。
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