[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原及其用于抗体检测的检测方法有效
| 申请号： | 201910265839.0 | 申请日： | 2019-04-03 |
| 公开（公告）号： | CN110007077B | 公开（公告）日： | 2022-02-22 |
| 发明（设计）人： | 潘孝成;沈学怀;赵瑞宏;张丹俊;戴银;胡晓苗;候宏艳;周学利 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/08 | 分类号： | C12N7/08;G01N33/569 |
| 代理公司： | 合肥金安专利事务所(普通合伙企业) 34114 | 代理人： | 金惠贞 |
| 地址： | 230031 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原及其用于抗体检测的检测方法。所述琼扩抗原是将第28代猪流行性腹泻病毒SD株的病毒液接种Vero细胞进行大量增殖，收集病毒培养物，冻融3次，加入聚乙二醇辛基苯基醚处理后，离心取上清，上清经超速离心，获得猪流行性腹泻病毒琼扩抗原。本发明工艺方法简单、科学，生产稳定，成本低廉，制成的猪流行性腹泻病毒琼扩抗原具有敏感性高、特异性强、稳定性好等特点。本发明琼扩抗原用于猪流行性腹泻病毒抗体的检测方法为猪流行性腹泻病毒抗体琼脂扩散试验检测方法。有较高的阳性检出率，且具有实验操作要求低、检测成本低等特点，特别适宜基层兽医检疫检验部门和养殖场使用。 | ||
| 搜索关键词： | 种猪 流行性 腹泻 病毒 抗原 及其 用于 抗体 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种猪流行性腹泻病毒琼扩抗原，其特征在于：由下述方法得到：（1）1mL第28代猪流行性腹泻病毒的病毒液，其TCID50值为10‑7.5，接种到25cm2细胞培养瓶中已长成单层的VERO细胞上，置37℃、5%CO2培养箱中培养72小时，接毒VERO细胞出现典型细胞病变，且开始聚集脱落，将细胞培养瓶置‑20℃以下至完全结冻，取出室温条件下融化，如此反复冻融3次，收集病毒培养物，所述病毒培养物包含细胞和培养液；所述第28代猪流行性腹泻病毒SD株于 2019 年 3 月29日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址 ：中国，武汉，武汉大学 ；其保藏名称为流行性腹泻病毒SD株，保藏编号为 ：CCTCC NO: V201915；（2）将病毒培养物按终浓度2‰的量加入甲醛混合均匀，于37℃摇床灭活24小时；（3）在冻融3次且灭活的病毒培养物中，按病毒培养物体积1/20的量加入聚乙二醇辛基苯基醚，室温振荡20分钟，转速6000r/min、温度4℃条件下，高速离心20min，收集上清液；（4）取上清液在转速45000r/min、温度4℃条件下，超速离心120min；弃去上清液，沉淀用0.01mol/L pH值7.4的PBS缓冲液充分溶解，PBS缓冲液的用量为病毒培养物体积1/15的量，既得猪流行性腹泻病毒琼扩抗原， ‑20℃分装保存。
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- 2010-05-21 - 2010-12-01 - C12N7/08
- 轮状病毒P[2]G3株和P[8]G1株在KMB17细胞上适应性培养和免疫原性，属于病毒培养方法。本发明将两株轮状病毒在KMB17细胞上连续10代适应培养，使细胞病变随病毒代次逐渐增快，感染性滴度递增并稳定在较高水平。病毒滴度分别达到7.75CCID50/ml及7.33CCID50/ml。病毒适应KMB17细胞且基因组稳定，用复制的病毒免疫小鼠其血清中和抗体效价分别为1∶16384及1∶8192。本发明适应性培养轮状病毒P[2]G3株株和P[8]G1株可在KMB17细胞中稳定复制，所产生病毒保持了亲本毒株的基本生物学特性，且有较好免疫原性。
- 制备减毒病毒株的方法-200880122154.0
- 马里亚·何塞菲娜·卡卢奇;埃尔萨·比阿特丽斯·达蒙特;卡洛斯·阿尔贝托·皮若尔;阿尔贝托·索尔·塞雷索;玛丽娜·钱恰 - 国家科学和技术研究委员会(CONICET);INIS生物技术有限责任公司
- 2008-11-19 - 2010-12-01 - C12N7/08
- 本发明涉及制备减毒病毒株的方法，其包括通过用浓度递增的至少一种硫酸化聚合物与对所述聚合物的抑制敏感的病毒一起连续传代而实现所述聚合物与所述病毒的接触，其中所述易感病毒的特征在于减少病毒板的方法，其中由所述减毒病毒得到的病毒株具有不同于产生其的野生型病毒株株的稳定的表型和基因型特征。所述方法包括通过用浓度递增的所述硫酸化聚合物与对所述聚合物的抑制敏感的病毒一起连续传代约15次或更多次而实现所述硫酸化聚合物与所述病毒的接触。根据本发明方法，第一次传代中所述至少一种硫酸化聚合物的浓度应小于所述聚合物针对野生状态下易感病毒的IC50。本发明还涉及通过上述方法获得的减毒病毒株在制备疫苗和药物组合物中的用途。
- 甲型流感病毒Vero细胞适应株及其应用-200910094223.8
- 廖国阳;范东瀛;孙明波;李卫东;周健;张英伟;姜述德 - 中国医学科学院医学生物学研究所
- 2009-03-13 - 2009-10-21 - C12N7/08
- 本发明公开了一种甲型流感病毒Vero细胞适应株及其应用，所述甲型流感病毒Vero细胞适应株命名为A/Yunnan/1/2005Va(H3N2)，该毒株的保藏号为CCTCC NO：V200514。该毒株含有H3亚型血凝素基因、N2亚型神经氨酸酶基因和具有在Vero细胞上高产性状流感病毒的6个内部基因。将该毒株在Vero细胞上连续传代培养，血凝滴度可保持在1024以上。该毒株可作为供体株与流行株遗传重配，或采用反向遗传学技术，将其6个内部基因与流行株2个表面蛋白基因进行基因重配，获得流行株的Vero细胞适应株，最终使用这一适应株制备Vero细胞流感疫苗或Vero细胞大流行流感疫苗。
- 新的甲型肝炎灭活疫苗病毒毒株及其培养方法-200810018656.0
- 张玉慧;曹雨露;周佳丽;胡焱灵;蒋建江;王益民;黄明 - 江苏延申生物科技股份有限公司
- 2008-03-08 - 2009-09-09 - C12N7/08
- 本发明提供一种制备甲型肝炎灭活疫苗的新的甲型肝炎病毒JS-4株及其培养方法。该毒株是从一个甲型肝炎急性感染患者粪便中分离，再传至Vero细胞上适应培养所得，经中和试验等方法证明为甲肝病毒，适应过程中，早代次培养周期为28天，传至10代后缩短至21天，继续培养10代，培养温度为35℃-36℃，病毒繁殖周期由28天缩短到21天，抗原滴度可达1∶640-1∶1280，感染性滴度为106.67-107.50CCID50/ml。经绒猴毒力试验证明该毒株毒力较弱，用它生产甲型肝炎灭活疫苗不仅在安全性方面更可靠，而且具有良好的免疫原性和保护效果，是生产甲型肝炎灭活疫苗的理想毒株。
- 鸡传染性支气管炎病毒弱毒疫苗株及其应用-200910128488.5
- 刘胜旺;孔宪刚;韩宗玺;邵呈昊;李慧昕 - 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
- 2009-03-23 - 2009-08-26 - C12N7/08
- 本发明公开了传染性支气管炎弱毒疫苗株LDT3-A株，并公开了该弱毒疫苗株在防制鸡传染性支气管炎中的应用及应用效果。本发明弱毒疫苗株的微生物保藏号是：CGMCC-2902。本发明弱毒疫苗株安全性好，对于鸡传染性支气管炎具有良好的免疫保护效力。本发明弱毒株可应用于制备成防治传染性支气管炎病毒的单苗或联苗等。
- 专利分类
