[发明专利]一种基于铂纳米簇检测胰蛋白酶及其抑制剂的试剂盒

摘要

本发明公开一种基于铂纳米簇检测胰蛋白酶及其抑制剂的试剂盒，其特征是利用合成的铂纳米簇模拟氧化酶催化3‑甲基‑2‑苯并噻唑啉酮腙盐酸盐和N‑乙基‑N‑（2‑羟基‑3‑磺丙基）‑3‑甲基苯胺钠盐偶合产物显色，鱼精蛋白可通过静电作用导致铂纳米簇聚集从而引起其催化活性降低，而鱼精蛋白会被胰蛋白酶水解，胰蛋白酶的存在有效抑制鱼精蛋白对铂纳米簇的聚集作用。因此，结合溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，直接用于胰蛋白酶及其抑制剂含量的测定。本发明提供的快速检测方法无须进行复杂的化学修饰或信号标记，抗干扰能力强，能快速、精确的实现对胰蛋白酶的快速检测，适于在临床应用，如胰腺炎等疾病的诊断。

主权项

1.一种基于铂纳米簇模拟氧化酶的胰蛋白酶快速检测方法，其特征是将胰蛋白酶和鱼精蛋白在Tris‑HCl缓冲液中37 ℃下温浴2h，之后加入铂纳米簇模拟氧化酶、3‑甲基‑2‑苯并噻唑啉酮腙盐酸盐和N‑乙基‑N‑（2‑羟基‑3‑磺丙基）‑3‑甲基苯胺钠盐，在40℃下温浴25 min后获得显色产物，目视观察颜色变化或测定紫外‑可见吸收；所述的铂纳米簇模拟氧化酶由以下步骤制得: 将1ml浓度为16 mmol/L 氯铂酸溶液和1 mL 40 mmol/L 柠檬酸钠加入到38ml超纯水中，室温下搅拌混匀两分钟，之后滴入200μl浓度为50mmol/L硼氢化钠用于还原氯铂酸；混合物在室温下不断搅拌1小时，反应后溶液装入截止分子量为3k的超滤管，6000 r/min离心超滤24小时，并水洗3次，得到柠檬酸稳定‑铂纳米簇水溶液，将柠檬酸稳定‑铂纳米簇水溶液冷冻干燥得到铂纳米簇模拟氧化酶粉末。