[发明专利]一种PRRSV-1病毒样颗粒及其制备方法在审
| 申请号： | 201910114837.1 | 申请日： | 2019-02-14 |
| 公开（公告）号： | CN109721643A | 公开（公告）日： | 2019-05-07 |
| 发明（设计）人： | 金宁一;李昌;许汪;杜寿文;田明尧;鲁会军;李霄;姜宇航;宋利娜;陈竞;付婷婷;郝鹏飞 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C07K14/08 | 分类号： | C07K14/08;C12N15/866;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京知呱呱知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立军;孙进华 |
| 地址： | 130122 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明实施例公开了一种PRRSV‑1病毒样颗粒，其包括：PRRSV LV株结构蛋白GP5；PRRSV LV株基质蛋白M；所述病毒样颗粒的表达PRRSV LV基质蛋白M以及共表达PRRSV LV结构蛋白GP5。本发明实施例还提供制备所述PRRSV‑1病毒样颗粒的方法，其包括以下步骤：分别克隆PRRSV LV株中表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因；将表达GP5蛋白和基质蛋白M的基因克隆至杆状病毒穿梭载体上，获得重组杆状病毒穿梭载体；将所述重组杆状病毒穿梭载体转化至DH10Bac感受态细胞，获得重组杆状病毒基因组。该方法适合于进行大规模的放大制备抗欧洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征疫苗，安全性高，具有良好的开发与应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 病毒样颗粒 基质蛋白 穿梭载体 制备 重组杆状病毒 结构蛋白 重组杆状病毒基因组 感受态细胞 方法适合 杆状病毒 呼吸障碍 基因克隆 共表达 猪繁殖 综合征 放大 克隆 疫苗 基因 转化 应用 开发 | ||
【主权项】：
1.一种PRRSV‑1病毒样颗粒，其特征在于包括：PRRSV LV结构蛋白GP5，其氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；PRRSV LV基质蛋白M，其氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述病毒样颗粒表面同时包含PRRSV LV基质蛋白M以及PRRSV LV结构蛋白GP5。
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- 2014-10-10 - 2015-02-11 - C07K14/08
- 本发明公开了一种小反刍兽疫病毒重组蛋白抗原，及利用该重组蛋白抗原作为检测线试剂、用于检测小反刍兽疫病毒抗体的快速检测试纸条。通过分析小反刍兽疫病毒N蛋白抗原表位，选取含有主要抗原表位的氨基酸片段SEQIDNo.1，并对其密码子进行优化，人工合成密码子优化的基因序列SEQIDNo.2，构建重组表达载体，转化大肠杆菌进行蛋白质表达，获得了小反刍兽疫病毒的重组蛋白抗原，纯化后可用于小反刍兽疫病毒抗体检测。基于该小反刍兽疫病毒的重组蛋白抗原建立的快速检测试纸条具有操作方便、检测快速、不需专门实验室和设备等优点，克服了现有检测方法的局限，可用于小反刍兽疫病毒抗体的快速检测和血清流行病学调查。
- 作为针对诺如病毒感染的疫苗的自装配肽纳米粒-201280061311.8
- P.布克哈德;C.库兰加拉 - 阿尔法－O肽股份公司
- 2012-10-05 - 2014-11-05 - C07K14/08
- 本发明描述了包含T细胞表位和展示诺如病毒蛋白VP1的P结构域的自装配肽纳米粒(SAPN)。本发明的纳米粒由连续肽链的聚集体组成，所述连续肽链包含通过接头区段连接的两个卷曲螺旋寡聚化结构域，其中寡聚化结构域的一个或两个在它们的肽序列中包含T细胞表位。这些纳米粒可用作疫苗和佐剂，用于预防和治疗诺如病毒感染。
- 具有免疫保护作用的牙鲆β诺达病毒衣壳蛋白及其制备方法-201410274004.9
- 张亦陈;刘逸尘;耿绪云;蒋嫣冉;孙金生 - 天津师范大学
- 2014-06-19 - 2014-08-27 - C07K14/08
- 本发明以感染牙鲆并具有接近100%致死率的β诺达病毒为对象，利用引物设计，将亲和纯化所需的His标签连接在重组的该病毒衣壳蛋白的C端，构建表达载体，确保纯化获得的表达产物均为具有序列表SEQIDNo.2所示的氨基酸序列的完整翻译的衣壳蛋白；利用BL21(DE3)plyS宿主菌可获得目的蛋白高效表达，产物采用SDS-PAGE及质谱分别进行分离和鉴定质控；在4℃条件下，使用尿素和PBS浓度分别为0.8M和0.05M，pH为7.0的缓冲液，可对包涵体高效复性。目前针对感染牙鲆的β诺达病毒尚无有效防御方法，使用本发明制备的重组衣壳蛋白进行常规免疫后，可显著提高养殖牙鲆对该病毒的抵抗力；本方法与从染病宿主体内分步纯化相比，具有产量大，批次稳定，且不受原料限制等优势，具有良好应用前景。
- 边界病病毒重组E2蛋白及其IgG抗体检测试剂盒-201410161997.9
- 毛立;李文良;刘霞;江杰元;杨蕾蕾;张纹纹;邓加武;王钟毓 - 江苏省农业科学院
- 2014-04-21 - 2014-07-30 - C07K14/08
- 本发明属于分子生物学领域，涉及一种边界病病毒（BDV）重组E2蛋白及其IgG抗体检测试剂盒。系将BDVE2蛋白主要抗原区域克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经重组大肠杆菌表达纯化后获得重组BDVE2蛋白，Westernblot试验证明该蛋白具有良好的抗原性。将该蛋白包被酶标板，通过抗原包被浓度、血清稀释度和作用时间、二抗浓度和作用时间以及显色时间的优化建立ELISA方法，检测山羊BDV阴性血清确定临界值和判定标准。本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定，抗原性好；在此基础上首次用于建立边界病病毒IgG抗体ELISA检测方法。
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